。如右图所示.
C0t 值的意义：C0 t1/2 值可以用来表示反应体系
中DNA 的总长度（单拷贝）。这种总长度称为
DNA 的复杂性。通过测定复性动力学可以预测
基因组的大小。
真核基因组DNA 的复性动力学：
第1 是快复性动力学组分，高度重复序列。
第2 是中复性动力学组分，中度重复序列。
第3 是慢复性动力学组分，单拷贝序列。
X：DNA 的复杂性
C0t 曲线特征：⑴原核生物每种图形的现状
大致相同；⑵重复序列多,复性快。
曲线意义：求DNA 的复杂度。
三、分子杂交
原理：基于DNA 的变性与复性的特性。双链DNA 加热以后，变成单链，在去除变性条件
后，在一定的条件下，具有互补顺序的DNA
能再形成双链。
探针：一种标记的一段DNA 或RNA，与待
测基因序列的DNA 或RNA 互补
分子杂交技术的种类：⑴固相杂交（待测核
酸固相化）；⑵Southern blot ，待测核酸为DNA；⑶Northern blot ，待测核酸为RNA。
液相原位杂交示意图：⑴Dots hybridization，点状杂交，待测核酸为DNA 或RNA；⑵Colony
or plaque hybridization， 菌落或噬菌班杂交，待测核酸为DNA。⑶Tissue hybridization ，组织
原位杂交，检测mRNA 表达和定位。
研究基因的定位，拷贝数，测序。
菌落原位杂交：
基因文库：染色体DNA 文库，cDNA 文库。
第三章基因和基因组
一、原核生物基因组
⒈特征
⑵通常含有质粒；
⑶操纵子结构；
⑷顺反子；
⑴只有一个染色体；
⑸有SD 序列；
⑹基因重叠；
⑺一般没有内含子；
⑻只有一个复制起始位点；
⑼以RNA 为产物的基因往
往是多拷贝的，蛋白质基因
单拷贝。⒉⑴фX174 ；⑵λ噬菌体
1．染色体、核小体结构
二、真核生物基因组
⑴染色体功能实现三要素：①着丝点；②端粒；③复制起始点。
⑵基因组大小和C 值矛盾
C 值：单倍体基因的全部DNA 含量。
C 值矛盾：①与预期相比，C 值明显过大；②同一物种，C 值相差很大。
⑶基因组的基因数目（下表：不同生物的基因数目）。
种类基因组大小（bp） 基因数目
支原体 1.0×106 750
噬菌体T4 1.6×105 200
大肠杆菌 4.2×106 2350
酵母 1.3×107 6100
果蝇 1.4×108 8750
人 3.3×109 65000-80000
⑷真核生物基因组序列特征：
具有多个复制起始位点；编码序列仅占一小部
分(3%) ，大部分为非编码序列。
单拷贝序列；轻度重复序列；
中度重复序列；高度重复序列。
不同物种中,重复序列/非重复序列的比例相差很大，原核基本不重复。
⑸真核生物的重复序列
①基因家族：Ⅰ.珠蛋白；Ⅱ.rDNA；Ⅲ.tDNA；Ⅳ.组蛋白基因。
rRNA 基因:酵母：140 次；果蝇：130～250 次；人类：300 次。
10 组蛋白基因家族：
左图1 为组蛋白
基因家族，箭头
←→表示转录
方向，右侧数字
表示基因组重
复次数。
左图2 为真核生
物基因组中不同
的多基因家族。
②Alu 的重复序列：Ⅰ.AG↓CT；Ⅱ.散布；Ⅲ.Alu 序列；Ⅳ.约90% 相同。
③卫星DNA
Ⅰ.隐蔽卫星DNA
Ⅱ.小卫星DNA
Ⅲ.微卫星DNA
A.单拷贝序列特征
a.含有内含子
内含子(intron)
外显子(exon)
内含子检测:
限制性内切酶图谱
DNA 的杂交内含子GT/AG 规则:
内含子与外显子连接处的序列特异: 内含子5’端为GT,3 ’端为AG, GT/AG 规则.
--------GT--------AG--------
外显子内含子外显子
B.存在不同的转录单位
a.简单转录单位
转录单位的基本组成:
b.复杂转录单位
转录方式不同,拼接方式不同.
三、基因定位
遗传图：基因在染色体上的位
置。
经典方法:
⒈遗传交换定位
⒉接合定位
⒊染色体爬行法
基因鉴定的方法：外显子特征
⒈与RNA 后cDNA 杂交；
⒉Zoo-blot 不同物种杂交；
⒊外显子捕捉；
⒋CG 岛鉴定；
⒌扣除杂交。

 

内含子GT/AG 规则:
内含子与外显子连接处的序列特异: 内含子5’端为GT,3 ’端为AG, GT/AG 规则.
--------GT--------AG--------
外显子内含子外显子
B.存在不同的转录单位
a.简单转录单位
转录单位的基本组成:
b.复杂转录单位
转录方式不同,拼接方式不同.
三、基因定位
遗传图：基因在染色体上的位
置。
经典方法:
⒈遗传交换定位
⒉接合定位
⒊染色体爬行法
基因鉴定的方法：外显子特征
⒈与RNA 后cDNA 杂交；
⒉Zoo-blot 不同物种杂交；
⒊外显子捕捉；
⒋CG 岛鉴定；
⒌扣除杂交。第四章DNA 复制
第一节 复制概论
⒈半保留复制
⒉复制的方向5’→3’
实验证据：在反应物中加入dNTP。
⒊具有固定的起始位

⒋DNA 聚合酶
⒌半不连续复制
一条链连续合成，称主导链Leading Strand；
另一条链分段合成，称随从链（随后链）Lagging Strand。

第二节 DNA复制的酶学
复制体系的鉴定
DNA 基因：与DNA 复制有
关的基因
条件型突变体、温度突变
体研究DNA 基因
快停突变体、慢停突变体
1．DNA 聚合酶
3 种klenow 片段
聚合酶I 活性
①5’－3’聚合活性
②3’－5’外切活性
③5’－3’外切活性
聚合酶Ⅲ：主要的复制酶
聚合酶活性

第三节 复制的基本模式
1. θ型
2. 滚环式
3. D 型
第四节 复制过程
一、复制的起始

三、回环模型
在oriC 和oriλ上起始涉及相同的反应
阶段 oriC oriλ
Ori 的识别和解链 DnaA O
解旋酶的结合和解链DnaB DnaB
DnaC P
RNA Pol RNA Pol
释放复合体 DnaJ？ DnaJ？
四、线形末端的复制
解决方法：
1. 成环
2. 末端冗余
3. 腺病毒

五、真核DNA 复制
1．DNA 聚合酶

DNA 聚合酶α δ ε β γ
位置核核核核线粒体
功能引发延伸修复，合成修复复制
酶活性Pol I 3‘-5’外切核酸酶3‘-5’外切核酸酶3‘-5’外切核酸酶
2.SV40DNA 复制
(1)RNA 引发，起始DNA 合成
(2)DNAδ延伸
功能 E.coli SV40
起始蛋白 DNA A T
螺旋酶 DNA B T
引发 DNA G Polα
聚合 Pol IIIα Polδ
外切酶活性 Pol IIIε Pol I δ
滑动钳 Pol IIIβ PCNA
单链结合蛋白 SSB RPA
3.端粒酶
端粒 TTGGGG
富含TG 结构，
不同生物重复次数不同
端粒酶性质
真核生物复制过程中的核小
体结构
亲本八聚体
全保留装配
图示详见武汉大学出版社
《分子生物学》第91 页。
图7－23 新产生的组蛋白
八聚体装配的三种模式
图7－24 亲代组蛋白八聚
体和新合成的组蛋白八聚体
与DNA 结合的可能方式，Ⅱ
是正确的。

第五章转录
第一节 原核生物的转录
一、转录的一般概念
1．转录是不对称的
模板链/非模板链；有义链/无义链；
正链/负链；编码链。
病毒的分类：
(1)RNA 病毒:RNA→mRNA(＋链病毒)；
RNA→互补RNA→翻译(－链病毒)。
(2)DNA 病毒
2．DDRP
3．5’；3’
4．pppA；pppG
5．RNApol 忠实性
6．转录泡
二、RNA 聚合酶
holoenzyme:σ起始因子，核心酶
真核生物三种RNA 聚合酶的特点
RNA Pol 位置产物相对活性对α-鹅膏蕈的敏感性
Pol Ⅰ 核仁 28S，18S，5.8S rRNAs 50％～70％ 不敏感
Pol Ⅱ 核质 hnRNA，mRNA，某些snRNAs 20％～40％ 高度敏感
Pol Ⅲ 核质 tRNA，5S rRNA，某些snRNAs ～10％ 片段特异,中度敏感
转录的抑制剂
抑制剂靶酶抑制作用
利福霉素细菌全酶和β亚基结合,抑制起始
链霉溶菌素细菌核心酶和β亚基结合,抑制起始
放射线素D 真核 PolⅠ 和DNA 结合,阻止延伸
α-鹅膏蕈真核 PolⅡ 和 RNA PolⅡ 结合
三、转录过程
原核生物基因的转录：
启动子高度保守
足迹法突变法硫酸二甲酯法
(足迹法图见下页起始过程左边图)
CAP 位点正调节位点
G 敏感性操纵子
25

起始过程
1. 模板结合,扫描式SCAN
2. 起始识别
3. 活化
4. 进入起始位点
26

延伸
终止
P 因子依赖型终止子
P 因子非依赖型终止子
通读效应
第二节 RNA反转录
64 年：抑制DNA 复制的放
线菌素能抑制RNA 病毒。
逆转录酶RDDP
RDDP RNA 病毒编码
活性: cDNA 制备
乙肝病毒
☆由逆转录病毒基因组中pol 基因
编码。是一种多功能酶。
☆有以RNA 为模板和以DNA 为模板合
成DNA 的DNA 聚合酶活性。
☆需要RNA 或DNA 做引物；
☆有核糖核酸酶 H 的活性（在逆转
录酶的C 端），能从3’→5’和从5’
→3’水解RNA，使RNA 与DNA 的杂
交体分离。逆向转录酶的生物学意义：
1.用于合成cDNA。建立cDNA 文库(cDNA Library)，获得基因或探针。
2.与PCR 连用 RT-PCR。

第三节 真核生物基因的转录
真核与原核基因转录的区别：课件讲义第25 页两张表和下表所示：
一、真核生物的启动子
RNA pol Ⅱ
二、启动子特征和转录因子
1. RNA 聚合酶Ⅰ效率最高

2. RNA 聚合酶Ⅱ
3. RNA 聚合酶Ⅲ
基因内启动子/基因外启动子
1. RNA pol Ⅱ
核心元件上游调控元件远端调控区

2. RNA pol Ⅰ

3. RNA pol Ⅲ
第四节 转录后产物加工
一、真核的mRNA
帽子结构
poly A
剪接
编辑

二、基因间隔序列的去除
mRNA；tRNA；rRNA。
实验证据：
三、tRNA

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