上皮细胞培养 1）表皮细胞培养 1．取材：取外科植皮或手术残余皮肤小块，以角化层薄者为佳，早产流产儿皮肤更好，切成0.5～1平方厘米小块。 2．EDTA处理：先置入0.02％EDTA中室温置5分钟。 3．冷消化：换入0.25％胰蛋白酶中，置 4℃ 过夜。 4．分离：取出皮...

结缔组织类细胞培养 1）成纤维细胞培养 用人或动物胚体为好；动物可用小鼠或鸡胚，去头和内脏，剪成小碎块后，用胰蛋白酶消化法培养；如为人胚，可取皮肤培养。幼儿包皮是培养成纤维细胞的很好对象。 2） 巨噬细胞培养 1．实验前三天，向每只小鼠腹腔内注入...

肌组织细胞培养 1）骨骼肌细胞培养 1．杀死动物，无菌取大腿肌组织，切成0.3～0.5厘米小块。 2．用不含钙镁离子的Hanks液配的0.25％胰蛋白酶消化，无菌纱网或纱布滤过，合成培养基加10％小牛血清培养，为促进分化可加1％的胎汁。 3．细胞接种量为2×106/皿，...

冻存方法 1．细胞：选对数生长期细胞，收集细胞24小时前换液一次。 2．计数：按常规方法把细胞制成细胞悬液，计数，令细胞密度达5×106/ml，离心去上清，吸入离心管中。 3．冻存液：先用培养液9分＋DMSO 1分（或甘油）配成10％的DMSO冻存液，按上法一滴滴加...

关血清使用中的常见问题解答 1.保存血清最好的办法？ 我们建议血清应保存在 -5℃ 至 -20℃ 。若你一次无法用完一瓶，建议您无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。 2.如何解冻血清才不会使产品质量受损？ 我们建议您将血清从冷冻箱中取出后，先置于2...

常规组织培养法 1）初代消化培养法 1. 准备：取各种已消毒的培养用品置于净化台面，紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。 2. 布局：点燃酒精灯，安装吸管帽。 3. 处理组织：把组织块置于烧杯中，用Hanks液漂洗2~3次，去除血污；如怀疑...

磷酸钙细胞转染技术 [实验目的] 1了解细胞转染技术原理和基本方法 2磷酸钙沉淀法的基本技术要点 [实验原理] 磷酸钙沉淀法是基于磷酸钙-DNA复合物的一种将DNA导入真核细胞的转染方法，磷酸钙被认为有利于促进外源DNA与靶细胞表面的结合。磷酸钙-DNA复合物粘附...

Transfection of neurons in culture PDF A.Ghosh, H. Dudek, M.E. Greenberg (1995) Transfection Procedure: 1. Replace media with warm DMEM (save culture media to return to plates after transfection). 2. Return plates to incubator for 1 hour....

在PCR的优化开始阶段，应用新的DNA模板，引物或热稳定DNA聚合酶等材料建立的PCR方法，其扩增效果一般总不是最佳的。这种PCR反应通常要求尽量抑制非特异性扩增和（或）增加目的DNA产物的产率。表1列举了一些通常遇到的问题和对PCR反应进行优化的一些推荐方法...

pcr产物的电泳检测时间一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。 假阴性，不出现扩增条带 pcr反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及活性 ④pcr循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研...