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注意：洗液具有强烈的腐蚀性，接触皮肤后会，皮肤会变黄，2天后会脱一层皮。
3、氟尿嘧啶：别 名：5?氟尿嘧啶 英 文 名：Fluorouracil (5 FU)。作用与用途：本品为嘧啶类的氟化物，属于抗代谢抗肿瘤药，能抑制胸腺嘧啶核苷酸合成酶，阻断脱氧嘧啶核苷酸转换成胸腺嘧啶核苷核，干扰DNA合成。对RNA的合成也有一定的抑制作用。
操作：在神经元培养时可以用来抑制胶质的生长。
4、L-谷氨酰氨： 资料：氨基酸是组成蛋白质的基本单位.不同种类的细胞对氨基酸的要求各异,但有几种氨
基酸细胞自身不能合成,必须依靠培养液提供,这几种氨基酸称为必需氨基酸.其中谷氨
酰胺是细胞合成核酸和蛋白质必需的氨基酸,在缺少谷氨酰胺时,细胞生长不良而死亡.
因此,各种培养液中都有较大量的谷氨酰胺.但是,由于谷氨酰胺在溶液中很不稳定,应
置于-20℃冰箱中保存,在使用前加入培养液内.已含谷氨酰胺的培养液在4℃冰箱中储
存2周以上时,还应重新加入原来量的谷氨酰胺.
三、海马神经元培养的方法：
操作步骤：
1．取 2ml 左右的L-多聚赖氨酸（0.1mg/ml） 包被培养板或coverlip；
2. 将出生小于24h的乳鼠6-8个用70%乙醇消毒，逐个断头，取脑，放入冰浴的解剖液中；
3. 用弯头镊镊取海马和皮层，去除脑膜和血管，分别放入干净的平皿中，用手术刀片分别将海马和皮层切细。
4. 将组织块置于15ml解剖液配制的0.25%胰蛋白酶中，37ºC，静置20min，取出时，勿摇晃。
5. 吸弃去上层胰酶液，下层组织沉淀约2ml, 加3ml种植液冲洗一遍。静置约3分钟。
6. 吸弃去上层液体，下层组织沉淀约2ml, 加3ml种植液冲洗一遍。离心800rpm×1min
7. 吸弃去上层液体，加2ml种植液
8. 用一根吸管，头烧细，冷却，轻轻吹打约15-20次，制成细胞悬液。
9. 取50ul细胞悬液稀释到1ml, 计数4大格。
10. 细胞浓度=4大格细胞数/4×稀释倍数×104/ml
11. 例如120/4×20×104/ml=6×106/ml
12. 按照0.6--2×106/ml的密度接种神经元。
13. 24h后全量换液成饲养液
14. 每三天用Neuronbasal使用液半量换液。
15. 接种后3-5天，加阿糖胞苷至终浓度10uM作用48小时，抑制胶质细胞的过度生长。
注意事项
1 用L-多聚赖氨酸（0.1mg/ml） 包被培养板后，要待其干后才能接种，因为其对神经元有毒性。L-多聚赖氨酸（0.1mg/ml）能回收再利用。
2 取脑组织时动作尽量要快，并且尽量低温操作。
3 分离皮层和海马时，要尽量分离脑膜和血管，否则有大量的成纤维细胞。
4 用吸管轻轻吹打细胞时，尽量不起泡沫，以免损伤神经元。
5 接种细胞的过程，动作要快，以免细胞聚集。
6 接种细胞后，24h勿移动，以免影响细胞贴壁。
四 结果：
大多数神经元在接种1h内贴壁，3-5h开始变平，并长出1-2个突起。3天后，许多细胞从胞体长出数个突起。神经元在7-10天开始成熟，胞体逐渐长至30-40um,晕光明显，胞核和核仁清晰可见，突起变粗，变长并且有分支，边缘清楚，发亮，形成明显的神经网络。神经元可存活1-2月。
(责任编辑：泉水) |
