重新氧化复性工艺提高rhIL-2收率

        日前从江苏金丝利药业有限公司http://www.kingsleyphar.com/main/index.asp,研究所获悉，该公司通过将重组人白细胞介素-2（rhIL-2）的生产废液进行重新氧化复性，使重组人白细胞介素-2的收率由原来的40%提高到60%，且该工艺稳定可靠，具有推广价值。

　　人白细胞介素-2（hIL-2）是一种淋巴因子，能有效地激活免疫细胞，促使其产生多种效应因子，因而具有广泛的生物学活性，目前在临床上被广泛用于抗肿瘤、抗感染及增强机体免疫功能等。

　　金丝利药业有限公司从事新药研发的徐金宝工程师介绍，基因工程产品--注射用重组人白细胞介素-2是江苏金丝利药业有限公司的一个主要产品。重组人白细胞介素-2由133个氨基酸残基组成，在58，105，125位各有1个半胱氨酸（Cys），其中Cys-125的存在，易导致二硫键错配或产生二聚体，而使其生物学活性降低。因此，在重组人白细胞介素-2的大规模生产过程中，为提高产品的纯度和活性，避免混入错配体和二聚体，在高效液相层析（HPLC）这一步骤中有60%左右的重组人白细胞介素-2洗脱液作为废液被丢掉，造成大量损失。

　　该公司在研究的基础上，在生产过程中，通过还原剂2-巯基乙醇将经HPLC洗脱过程中收集的二聚体和错配体还原，然后重新氧化复性，使之能够形成具有生物学活性的正确配对的二硫键，再上G-25柱、HPLC柱，使重组人白细胞介素-2的回收率提高20%以上。

　　研发人员还强调，要将变性状态的重组人白细胞介素-2转变为具有生物学活性的产品，表面活性剂的种类及浓度，氧化剂的选择及工作浓度，以及待复性蛋白质的浓度等因素均应严格限定，而复性温度与时间的影响相对较小。另外，在收集了错配体和二聚体的洗脱液经40℃旋转蒸发除去乙腈后，溶液可能会有部分重组人白细胞介素-2蛋白质析出，对此，在加入缓冲液后，要充分放置，使重组人白细胞介素-2能够全部溶解。具体方法为先用等体积的双蒸水稀释1倍，用含2%十二烷基硫酸钠、10毫摩尔/升的氯化钠的0.1摩尔/升磷酸钠缓冲液（pH值6.8）再稀释1倍，室温放置两小时。

　　另外，为使二硫键能够充分打开，还原剂必须足量，在1.5~2.0毫升/毫克的蛋白质浓度下，用终浓度为5毫摩尔/升的还原剂较为理想。氧化剂选用0.1%体积的50毫摩尔/升硫酸酮，于30℃下氧化复性1小时，随后用2%体积的0.5摩尔/升乙二胺四乙酸二钠（EDTA）终止反应。并且，根据生产需要，还可将此方法继续下去，进行第3次、第4次纯化。生产实践表明，二次纯化的样品活性都在6.4×106单位/毫升以上，符合该产品的质量标准。 (责任编辑：泉水)

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