北京航空航天大学生物与医学工程学院与北京大学化学与分子工程学院的研究人员,以绿色荧光蛋白(GFP)和红色荧光蛋白(RFP)为材料,成功开发出一种用于活细胞内检测蛋白质相互作用的新型双荧光共定位系统。该研究成果已发表于《科技导报》。
荧光蛋白作为细胞分子生物学中广泛应用的分子探针,能够在活细胞正常生理水平下实时反映细胞、生物大分子及蛋白质的相互作用,极大地推动了活细胞内分子探针技术的发展。然而,传统荧光蛋白技术在检测蛋白质相互作用时,常因荧光蛋白在细胞内随机分布而导致假阳性或假阴性结果。
本研究通过基因工程方法,将RFP和GFP的N末端和C末端分别插入特异的定位信号序列,使得两种荧光蛋白单独表达(或连接无相互作用的蛋白对)时,在细胞内空间位置上分离。当目标蛋白发生相互作用时,两种荧光蛋白因空间邻近而产生共定位现象,从而实现对蛋白质相互作用的可视化检测。实验结果显示,该系统的共定位现象明显,灵敏度高,可靠性强。
该成果不仅突破了国外同类技术的专利保护,还为国内细胞分子生物学和蛋白质相互作用研究领域提供了一种更加灵敏、实用的检测工具,具有重要的科学意义和应用前景。