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实验室常用技术参数资料(4)

时间:2005-04-15 00:14来源:本站原创 作者:bioguider 阅读:

  8.2×BES缓冲盐溶液

  【配制方法】

  用总体积90ml的蒸馏水溶解1.07g盐溶液BES[N,N-双(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸]、1.6g NaCl和0.027g Na2HPO4,室温下用HCl调节 该溶液的pH值至6.96、然后加入蒸馏水定容至100ml,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成小份,保存于-20℃。

  9.1mol/L CaCl2溶液

  【配制方法】

  在200ml蒸馏水中溶解54g CaCl2·6H2O,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成10ml小份贮存于-20℃。

  【注意】

  制备感受态细胞时,取出一小份解冻并用蒸馏水稀释至100ml,用Nalgene滤器(0.45μm孔径)过滤除菌,然后骤冷至0℃。

  10.2.5mol/L CaCl2溶液

  【配制方法】

  在20ml蒸馏水中溶解13.5g CaCl2·6H2O,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成1ml小份贮存于-20℃。

  11.1mol/L二硫苏糖醇(DTT)溶液

  【配制方法】

  用20ml 0.01mol/L乙酸钠溶液(pH5.2)溶解3.09g DTT,过滤除菌后分装成1ml小份贮存于-20℃。

  【注意】

  DTT或含有DTT的溶液不能进行高压处理。

  12.脱氧核苷三磷酸(dNTP)溶液

  【配制方法】

  把每一种dNTP溶解于水至浓度各为100mmol/L左右,用微量移液器吸取0.05mol/l Tris碱分别调节 每一dNTP溶液的pH值7.0(用pH试纸检测),把中和后的每种dNTP溶液各取一份作适当稀释,在下表中给出的波长下读取光密度计算出每种dNTP的实际浓度,然后用水稀释成终浓度为50mmol/L的dNTP,分装成小份贮存于-70℃。

碱基

波长(nm)

消化系数(ε)[L/(mol·cm)]

A

259

1.54×104

G

253

1.37×104

C

271

9.10×103

T

260

7.40×103

  比色杯光径为1cm时,吸光度=εM

  13.0.5mol/l EDTA(pH8.0)溶液

  【配制方法】

  在800ml水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na·2H2O),在磁力搅拌器上剧烈搅拌,用NaOH调节 溶液的pH值至8.0(约需20g NaOH颗粒)然后定容至1L,分装后高压灭菌备用。

  【注意】

  EDTA二钠盐需加入NaOH将溶液的pH值调至接近8.0,才能完全溶解。

  14.溴化乙锭(10mg/ml溶液)

  【配制方法】

  在100ml水中加入1g溴化乙锭,磁力搅拌数小时以确保其完全溶解,然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中,保存于室温。

  【注意】

  小心:溴化乙锭是强诱变剂并有中度毒性,使用含有这种染料的溶液时务必戴上手套,称量染料时要戴面罩。

  15.2×HEPES缓冲盐溶液

  【配制方法】

  用总量为90ml的蒸馏水溶解1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2PO4·2H2O、0.2g葡聚糖和1gHEPES,用0.5mol/l NaOH调节 pH值至7.05,再用蒸馏水定容至100ml。用0.22μm滤器过滤除菌,分装成5ml小份,贮存于-20℃。

  16.IPTG溶液

  【配制方法】

  IPTG为异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(分子量为238.3),在8ml蒸馏水中溶解2g IPTG后,用蒸馏水定容至10ml,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成1ml小份贮存于-20℃。

  17.1mol/L乙酸镁溶液

  【配制方法】

  在800ml水中溶解214.46g四水乙酸镁,用水定容至1L过滤除菌。

  18.1mol/L MgCl2溶液

  【配制方法】

  在800ml水中溶解203.4g MgCl2·6H2O,用水定容至1L,分装成小份并高压灭菌备用。

  【注意】

  MgCl2极易潮解,应选购小瓶(如100g)试剂,启用新瓶后勿长期存放。

  19.β-巯基乙醇(BME)溶液

  【配制方法】

  一般得到的是14.4mol/L溶液,应装在棕色瓶中保存于4℃。

  【注意】

  BME或含有BME的溶液不能高压处理。

  20.NBT溶液

  【配制方法】

  把0.5g氯化氮蓝四唑溶解于10ml 70%的二甲基甲酰胺中,保存于4℃。

  21.酚/氯仿溶液

  【配制方法】

  把酚和氯仿等体积混合后用0.1mol/L Tris·HCl(pH7.6)抽提几次以平衡这一混合物,置棕色玻璃瓶中,上面覆盖等体积的0.01mol/l Tris·HCl(pH7.6)液层,保存于4℃。

  【注意】

  酚腐蚀性很强,并可引起严重灼伤,操作时应戴手套及防护镜,穿防护服。所有操作均应在化学通风橱中进行。与酚接触过的部位皮肤应用大量的水清洗,并用肥皂和水洗涤,忌用乙醇。

  22.10mmol/L苯甲基磺酰氟(PMSF)溶液

  【配制方法】

  用异丙醇溶解PMSF成1.74mg/ml(10mmol/L),分装成小份贮存于-20℃。如有必要可配成浓度高达17.4mg/ml的贮存液(100mmol/L)。

  【注意】

  PMSF严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤,吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF,应立即用大量水冲洗之。凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。

  PMSF在水溶液中不稳定。应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。PMSF在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快,且25℃的失活速率高于4℃。pH值为8.0时,20μmmol/l PMSF水溶液的半寿期大约为85min,这表明将PMSF溶液调节 为碱性(pH>8.6)并在室温放置数小时后,可安全地予以丢弃。

  23.磷酸盐缓冲溶液(PBS)溶液

  【配制方法】

  在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,用HCl调节 溶液的pH值至7.4加水定容至1L,在15lbf/in2(1034×105Pa)高压下蒸气灭菌20min。保存于室温。

  24.1mol/L乙酸钾(pH7.5)溶液

  【配制方法】

  将9.82g乙酸钾溶解于90ml纯水中,用2mol/L乙酸调节 pH值至7.5后加入纯水定容到1L,保存于-20℃。

  25.乙酸钾溶液(用于碱裂解)

  【配制方法】

  在60ml 5mol/L乙酸钾溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml水,即成钾浓度为3mol/L而乙酸根浓度为5mol/L的溶液。

  26.3mol/L乙酸钠(pH5.2和pH7.0)溶液

  【配制方法】

  在80ml水中溶解408.1g三水乙酸钠,用冰乙酸调节 pH值至5.2或用稀乙酸调节 pH值至7.0,加水定容到1L,分装后高压灭菌。

  27.5mol/L NaCl溶液

  【配制方法】

  在800ml水中溶解292.2g NaCl加水定容至1L,分装后高压灭菌。

  28.10%十二烷基硫酸钠(SDS)溶液

  【配制方法】

  在900ml水中溶解100g电泳级SDS,加热至68℃助溶,加入几滴浓盐酸调节 溶液的pH值至7.2,加水定容至1L,分装备用。

  【注意】

  SDS的微细晶粒易扩散,因此称量时要戴面罩,称量完毕后要清除残留在称量工作区和天平上的SDS,10%SDS溶液无须灭菌。

  29.20×SSC溶液

  【配制方法】

  在800ml水中溶解175.3g NaCl和88.2g柠檬酸钠,加入数滴10mol/l NaOH溶液调节 pH值至7.0,加水定容至1L,分装后高压灭菌。

  30.20×SSPE溶液

  【配制方法】

  在800ml水中溶解17.5g NaCl、27.6g NaH2PO4·H2O和7.4g EDTA,用NaOH溶液调节 pH值至7.4(约需6.5ml 10ml/L NaOH),加水定容至1L,分装后高压灭菌。

  31.100%三氯乙酸溶液

  【配制方法】

  在装有500g TCA的瓶中加入227ml水,形成的溶液含有100%(M/V)TCA。

  32.1mol/L Tris溶液

  【配制方法】

  在800ml水中溶解121.91g Tris碱,加入浓HCl调节 pH值至所需值。

  pH   HCl

  7.4   70ml

  7.6   60ml

  8.0   42ml

  应使溶液冷至室温后方可最后调定pH值,加水定容至1L,分装后高压灭菌。

  【注意】

  如1mol/L溶液呈现黄色,应予丢弃并置备质量更好的Tris。

  尽管多种类型的电极均不能准确测量Tris溶液的pH值,但仍可向大多数厂商购得合适的电极。

  Tris溶液的pH值因温度而异,温度每升高1℃,pH值大约降低0.03个单位。例如:0.05mol/L的溶液在5℃、25℃、和37℃时的pH值分别为9.5、8.9和8.6。

  33.Tris缓冲盐溶液(TBS)(25mmol/l Tris)

  【配制方法】

  在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl、0.2g KCl和3g Tris碱,加入0.015g酚并用HCl调至pH值至7.4,用蒸馏水定容至1L,分装后在151bf/in2(1.034×105Pa)高压下蒸汽灭菌20min,于室温保存。

  34.X-gal溶液

  【配制方法】

  X-gal为5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D半乳糖苷。用二基甲酰胺溶解X-gal配制成的20mg/ml的贮存液。保存于一玻璃管或聚丙烯管中,装有X-gal溶液的试管须用铝箔封裹以防因受光照而被破坏,并应贮存于-20℃。X-gal溶液无须过滤除菌。

 

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  杂交试验中用于降低背景的封闭剂

(责任编辑:泉水)

试剂

用途

Denhardt试剂 Northern杂交
使用RNA探针的杂交
单拷贝序列的Southern杂交
将DNA固定于尼龙膜上的杂交
Denhardt试剂通常配制50×贮存液,过滤后保存于-20℃。可将该贮存液10倍稀释于预杂交液(常为含有0.5%SDS和100μg/ml经变性被打断的鲑精DNA的6×SSC或6×SSPE)中。50×Denhardt液中含5g聚蔗糖(Ficoll,400型,Pharmacia)、5g聚乙烯吡咯烷酮和5g牛血清白蛋白(组分V”Sigmal),加水至终体积为500ml。
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