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实验室基本操作(2)

时间:2006-05-19 22:20来源:本站原创 作者:admin 阅读:

    图1-1 (I)是微量λ吸管,用于1~500ml (1λ= 1ml)的移液,用吸水纸蘸出多吸的液体。

    图1-1 (J)是毛细微量吸管,用于1~20ml的移液,常用于薄层层析和纸层析。

    吸管吸取溶液最常用的是洗耳球(图1 中(B))。此外,为便于移液,还可以使用新式的吸液球(图1-1 中(C)),球上有A、B、C三个玻璃珠阀门,吸液之前,先用拇指和食指按捏A阀,用其他手指挤压球体,由A阀排气,使球内形成负压,插入吸管吸液时,用拇指和食指按捏B阀,将溶液吸至所需刻度,放液时按捏C阀,直至溶液流尽,若需吹出管尖残液时,可在按捏C阀的同时,用中指挤压C阀前面的小球泡,即可吹出管尖残液。

    还有一种“吸管泵”(图1-1 中(D))使用更为方便,插入吸管后,用拇指转动上部的小轮,即可使园柱形泵内的柱塞上下移动,将溶液吸入或排出吸管,尤其是在移取10mL 以上的溶液时,用“吸管泵”最为方便。

    ⑶ 微量进样器

    微量进样器常用作气相和液相色谱仪的进样器,在生化实验中主要是用作电泳实验的加样器,通常可分为无存液和有存液两种。

     1) 0.5mL ~5mL无存液微量进样器:  进样器的不锈钢芯子直接通到针尖端处,不会出现存液,所以可用于5mL以下的极微量液体进样。

     2) 10mL~100mL有存液微量进样器: 不锈钢的针尖管部分是空管,进样器的柱塞不能到达,因而管内会存有空气或液体,其使用注意事项是:① 不可吸取浓碱溶液,以免腐蚀玻璃和不锈钢零件。 ② 因为有存液,所以吸液时要来回多拉几次,将针尖管内的气泡全部排尽。 ③ 针尖管内孔极小,使用后,尤其是吸取过蛋白质溶液后,必须立即清洗针尖管,防止堵塞。若遇针尖管堵塞,不可用火烧,只能用φ0.1mm的不锈钢丝耐心串通。 ④ 进样器未润湿时不可来回干拉芯子,以免磨损而漏气。 ⑤ 若进样器内发黑,有不锈钢氧化物,可用芯子蘸少量肥皂水,来回拉几次即可除之。

    ⑷ 自动取液器

    这种取液器在生化实验中大量地使用,它们主要用于多次重复的快速定量移液,可以只用一只手操作,十分方便。移液的准确度(即容量误差)为 ±(0.5%~1.5%),移液的精密度(即重复性误差)更小些,为 ≤0.5%。

    取液器可分为二种:一种是固定容量的,常用的有100ml 、200mL和1000mL等几种;另一种是可调容量的取液器,常用的有200mL、1000mL和5000mL等多种规格。每种取液器都有其专用的聚丙烯塑料吸头,吸头通常是一次性使用,当然也可以超声清洗后重复使用,而且此种吸头还可以进行120℃高压灭菌。

    可调式自动取液器的操作方法是用拇指和食指旋转取液器上部的旋钮,使数字窗口出现所需容量体积的数字,在取液器下端插上一个塑料吸头,并旋紧以保证气密,然后四指并拢握住取液器上部,用拇指按住柱塞杆顶端的按钮,向下按到第一停点,将取液器的吸头插入待取的溶液中,缓慢松开按钮,吸上液体,并停留1~2秒钟(粘性大的溶液可加长停留时间),将吸头沿器壁滑出容器,用吸水纸擦去吸头表面可能附着的液体,排液时吸头接触倾斜的器壁,先将按钮按到第一停点,停留一秒钟(粘性大的液体要加长停留时间),再按压到第二停点,吹出吸头尖部的剩余溶液,如果不便于用手取下吸头,可按下除吸头推杆,将吸头推入废物缸。

    自动取液器的使用注意事项是: ① 吸取液体时一定要缓慢平稳地松开拇指,绝不允许突然松开,以防将溶液吸入过快而冲入取液器内腐蚀柱塞而造成漏气。 ② 为获得较高的精度,吸头需予先吸取一次样品溶液,然后再正式移液,因为吸取血清蛋白质溶液或有机溶剂时,吸头内壁会残留一层“液膜”,造成排液量偏小而产生误差。③ 浓度和粘度大的液体,会产生误差,为消除其误差的补偿量,可由试验确定,补偿量可用调节旋钮改变读数窗的读数来进行设定。④ 可用分析天平称量所取纯水的重量并进行计算的方法,来校正取液器,1mL 蒸馏水20℃时重0.9982g。


              图1-2  自动取液器示意图

7. 缓冲溶液

    缓冲溶液是一类能够抵制外界加入少量酸和碱的影响,仍能维持pH值基本不变的溶液。该溶液的这种抗pH变化的作用称为缓冲作用。缓冲溶液通常是由一或两种化合物溶于溶剂(即纯水)所得的溶液,溶液内所溶解的溶质(化合物)称之为缓冲剂,调节缓冲剂的配比即可制得不同pH的缓冲液。

    缓冲溶液的正确配制和pH值的准确测定,在生物化学的研究工作中有着极为重要的意义,因为在生物体内进行的各种生物化学过程都是在精确的pH值下进行的,而且受到氢离子浓度的严格调控,能够做到这一点是因为生物体内有完善的天然缓冲系统。生物体内细胞的生长和活动需要一定的pH值,体内pH环境的任何改变都将引起与代谢有关的酸碱电离平衡移动,从而影响生物体内细胞的活性。为了在实验室条件下准确地模拟生物体内的天然环境,就必须保持体外生物化学反应过程有体内过程完全相同的pH值,此外,各种生化样品的分离纯化和分析鉴定,也必须选用合适的pH值,因此,在生物化学的各种研究工作中和生物技术的各种开发工作中,深刻地了解各种缓冲试剂的性质,准确恰当地选择和配制各种缓冲溶液,精确地测定溶液的pH值,就是非常重要的基础实验工作。下表列出某些人体体液的pH值:

表1—3  人体体液pH

    体  液
  pH
     体  液
 pH
 
    血  清
  7.35~7.45
     大肠液
 8.3~8.4
 
   成人胃液
  0.9~1.5
       泪
 6.6~6.9 
 
    唾  液
  6.3~7.1
       尿
 4.8~7.5
 
    胰  液
  7.5~8.0
     脑脊液
 7.35~7.45
 
7.1 基本概念

(责任编辑:泉水)
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