PB和PBS是免疫细胞化学实验中最为常用的缓冲液,0.01mol/L的PBS主要用于漂洗组织标本、稀释血清等,其pH应在7.25~7.35之间,否则需要调整。0.1mol/L的PB常用于配制固定液、蔗糖等。一般情况下,0.2mol/l PB的pH值稍高些,稀释成0.01mol/L的PBS时,常可达到要求的pH值,若需调整pH,通常也是调PB的pH。 3.Karasson –Schwlt’s磷酸盐缓冲液 试剂: NaH2PO4·H2O 3.31g Na2HPO4·7H2O 33.77g 重蒸水 至1000ml 配制方法:同前 该缓冲液主要用于配制Zamboni’s固定液。 4.0.5mol/L pH7.6的Tris- HCl缓冲液。 试剂:Tris(三羟甲基氨基甲烷) 60.57g 1N HCl 约420ml 重蒸水 至1000ml 配制方法:先以少量重蒸水(300~500ml)溶解Tris,加入HCl后,用1N的HCl或1N的NaOH将pH调至7.6,最后加重蒸水至1000ml。此液为储备液,于4℃冰箱中保存。免疫细胞化学中常用的Tris-HCl缓冲液浓度为0.05mol/L,用时取储备液稀释10倍即可。 该液主要用于配制Tris缓冲生理盐水(TBS)、DAB显色液。 5.Tris缓冲生理盐水(Tris Buffered,Saline,TBS) 试剂:0.5mol/L Tris-HCl缓冲液 100ml NaCl 3.5~9g(0.15mol/L) 重蒸水 至1000ml 配制:先以重蒸水少许溶解NaCl,再加Tris-HCl缓冲液,最后加重蒸水至1000ml,充分摇匀使Tris终浓度为0.05mol/L。 TBS主要用于漂洗标本,常用于免疫酶技术中。 6.Tris-TBS(PBS) 试剂:Triton X-100 10ml(1%)或3ml(0.3%) 0.5mol/L Tris缓冲液(pH7.6) 1000ml(50ml)或(0.2mol/L的PB) NaCl 8.5~9g 重蒸水 至1000ml 配制方法:先以重蒸水少许溶解NaCl后,加入Triton X-100及Tris缓冲液或(PB),最后加重蒸水至1000ml,充分摇匀。 该液常用浓度为1%及0.3%,前者主要用于漂洗标本,后者主要用于稀释血清。 7.0.1mol/L(pH7.4)二甲胂酸缓冲液 试剂:0.2mol/L二甲胂酸钠 500ml 0.1N HCl 28ml 蒸馏水 至1000ml 配制方法:先称取二甲胂酸钠(MW:214)42.8g,加蒸馏水至1000ml,使0.2mol/L的二甲胂酸钠溶液;再取HCl 1.7ml加蒸馏水至1000ml ,配成0.1N,最后 取0.2mol/L二甲胂酸钠溶液500ml及0.1n HCl 28ml混合,加蒸馏水至1000ml,即为0.1mol/L的二甲胂酸钠缓冲液。 (责任编辑:泉水) |