2.3.2 幽门螺杆菌染色体DNA酶切 幽门螺杆菌自三种不同胃病患者的胃粘膜中分离，Cp397（慢性胃炎、溃疡病），Cp400（十二脂肠球溃疡），Cp407（浅表萎缩性胃炎），提取染色体DNA后，用Bg1Ⅱ进行酶解，各管于37°C水浴中，作用2.5h电泳40V.2h后30V17h，电泳后将琼脂糖凝胶（E.B加在凝胶中）置紫外灯下观察照像。可以看出用HindⅢPstⅠey XbaⅠ对不同弯曲菌酶切图谱有所不同，但其中以PstⅠ酶切的带型较清晰，还可看到四株不同来源的空肠弯曲菌及三株幽门螺杆菌，在较为长期保存后，染色体DNA酶切图谱带型完全一致。

　　3 讨论

　　弯曲菌菌种保存，对于深入开展对本菌的研究，有着非常重要的意义，文献上介绍的方法不多，幽门螺杆菌用全血或加20%小牛血清布氏汤或加入各种添加剂进行保存，但时间均不太长，Drum等用10%小牛血清布氏汤液体培养物，经24h培养后，添加50%甘油及小牛血清，于-70°C中能存活6个月；空肠弯曲菌用50%卵黄盐水，使用时，接种一白金耳菌苔，置微氧罐内，增殖24h，换上橡皮塞，置35°C温箱中，可保存5个月之久，在布氏肉汤内于-20°C中可存活2个月；15%甘油布氏肉汤中，在-70°C中可存活半年，但以上方法所保存的菌株，均不能获得完全存活；而我们所用的10%的小牛血清布氏肉汤，将24h～48h的新鲜菌苔，直接刮到保存的Eppendorff离心小管中，每管加培养基1ml，不需重新培养，可直接置-20°C中预冻，过夜后，再于-70°C中作长期保存，细菌染色体DNA限制性内切酶分析，可应用于流行病学调查及菌型的鉴定，同型的菌株应该有完全相同的染色体DNA酶谱；实验证明经这种方法对弯曲菌保存后、其生物学特性及染色体DNA酶切图谱的检查，均获得性状的前后一致，因此，这是一种比较简易可行的保藏方法，但对更为长期的保存，仍需作进一步的研究。

陈晶晶1 蒋秀高1庄弢1 甘毓麟2 齐强2 李文东2

1中国预防医学院科学院流行病学微生物学研究所（北京 102206）

*国家自然科学基金资助课题