蛋白质体外表达与进化技术

    　蛋白质体外表达与进化技术包括核糖体展示技术和mRNA展示技术。与蛋白质体内表达系统相比，体外表达技术可产生较大容量的蛋白质文库(约1012～1013左右)，同时可在回收编码蛋白质的信息时对文库进行了进化。

        核糖体展示技术易构建大容量的文库，可减少由于细胞内表达所产生的差异性，易于产生突变。它可用于表达和筛选具有特异结合能力的功能性单链抗体。mRNA均和核糖体相连，形成scFv一核糖体一mRNA复合体，用抗原筛选后得到编码该抗体的cDNA，以cDNA为模板继续进行下一轮的表达和筛选。核糖体展示技术模拟了体内抗体的进化过程。最后得到的筛选产物序列十分相似，均来源于核糖体展示前的原始序列。mRNA展示通过在体外翻译一段和嘌呤霉素相连的mRNA来产生蛋白质文库，翻译后形成的mRNA一蛋白质复合体用PCR的方法回收编码新蛋白质的序列，可产生大于1O13的多肽或蛋白质文库。在mRNA展示中产生的抗体片段文库与人的天然免疫系统及构建的基因工程抗体文库相比发生了显著的进化，亲和力得到成熟。

        蛋白质体外表达和进化技术的应用使构建超大容量的文库成为常规方法，文库构建和mRNA回收时应用PCR技术可在每一轮表达筛选后对文库进行进化，十分有利于抗体的亲和成熟。目前，核糖体展示技术已广泛应用于筛选、进化具有较高亲和力的scFv。而mRNA展示技术应用较少，因此还需要广泛的应用mRNA展示技术以评价该技术在蛋白质表达和进化领域的意义。 (责任编辑：泉水)

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