移植 1.将胚状体转移至一15ml 圆锥形管中放置3~5分钟使胚状体沉降下来。 细胞被离心3分钟会更好。放置使之沉降将会去除更多的单个细胞(包括死细胞)而这些细胞可以被离心下来。 2.去除上清将胚状体重悬于无钙镁离子的1×PBS中 3.离心3分钟 4.去除上清加入1×胰酶(10cm的培养皿加1ml) 5.37℃水浴5分钟 6.加入5mlEB培养基小心吹打约10次 小心处理细胞很重要,进行细胞传代分散细胞时不可剧烈吹打。 7.离心2分钟 8.吸出上清将细胞重悬于500μl EB培养基 9.用光滑的巴斯德吸管小心吹打5次 10.离心2次 11.吸出上清将细胞重悬于100μl EB培养基
烟酸己可碱标记ES细胞进行移植 1.准备一10μg/ml的烟酸已可碱染液(双苯酰亚胺,在冷冻室118) 2.加入1mg(你能称到的最小量)到5ml EB培养基(制成200μg/ml) 3.将溶液稀释成10μg/ml (100μl 200μg/ml 溶液和1.9ml EB培养基) 4.如前所述将细胞重悬于2ml烟酸已可碱染液而不是EB培养基中制备ES细胞悬液, 5.将悬液置于室温(或冰上)30分钟 6.离心2分钟 7.吸出上清将细胞重悬于2ml EB培养基 8.重复一次 9.离心2分钟 10.吸出上清将细胞重悬于100μl EB培养基并置于冰上。
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