我们热爱生命科学!-生物行
当前位置: 主页 > 生物技术 > 细胞生物学

小鼠胚胎干细胞培养实验步骤(2)

时间:2005-09-23 15:56来源:BIOON 作者:bioguider 点击: 1856次

移植
1.将胚状体转移至一15ml 圆锥形管中放置3~5分钟使胚状体沉降下来。
细胞被离心3分钟会更好。放置使之沉降将会去除更多的单个细胞(包括死细胞)而这些细胞可以被离心下来。
2.去除上清将胚状体重悬于无钙镁离子的1×PBS中
3.离心3分钟
4.去除上清加入1×胰酶(10cm的培养皿加1ml)
5.37℃水浴5分钟
6.加入5mlEB培养基小心吹打约10次
小心处理细胞很重要,进行细胞传代分散细胞时不可剧烈吹打。
7.离心2分钟
8.吸出上清将细胞重悬于500μl EB培养基
9.用光滑的巴斯德吸管小心吹打5次
10.离心2次
11.吸出上清将细胞重悬于100μl EB培养基

烟酸己可碱标记ES细胞进行移植
1.准备一10μg/ml的烟酸已可碱染液(双苯酰亚胺,在冷冻室118)
2.加入1mg(你能称到的最小量)到5ml EB培养基(制成200μg/ml)
3.将溶液稀释成10μg/ml (100μl 200μg/ml 溶液和1.9ml EB培养基)
4.如前所述将细胞重悬于2ml烟酸已可碱染液而不是EB培养基中制备ES细胞悬液,
5.将悬液置于室温(或冰上)30分钟
6.离心2分钟
7.吸出上清将细胞重悬于2ml EB培养基
8.重复一次
9.离心2分钟
10.吸出上清将细胞重悬于100μl EB培养基并置于冰上。

(责任编辑:泉水)
顶一下
(22)
100%
踩一下
(0)
0%
------分隔线----------------------------
发表评论
请自觉遵守互联网相关的政策法规,严禁发布色情、暴力、反动的言论。
评价:
表情:
用户名: 验证码:点击我更换图片