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分子生物学笔记(4)

时间:2005-12-30 20:56来源:Internet 作者:bioguider 阅读:

 

内含子GT/AG 规则:
内含子与外显子连接处的序列特异: 内含子5’端为GT,3 ’端为AG, GT/AG 规则.
--------GT--------AG--------
外显子内含子外显子
B.存在不同的转录单位
a.简单转录单位
转录单位的基本组成:
b.复杂转录单位
转录方式不同,拼接方式不同.
三、基因定位
遗传图:基因在染色体上的位
置。
经典方法:
⒈遗传交换定位
⒉接合定位
⒊染色体爬行法
基因鉴定的方法:外显子特征
⒈与RNA 后cDNA 杂交;
⒉Zoo-blot 不同物种杂交;
⒊外显子捕捉;
⒋CG 岛鉴定;
⒌扣除杂交。第四章DNA 复制
第一节 复制概论
⒈半保留复制
⒉复制的方向5’→3’
实验证据:在反应物中加入dNTP。
⒊具有固定的起始位

⒋DNA 聚合酶
⒌半不连续复制
一条链连续合成,称主导链Leading Strand;
另一条链分段合成,称随从链(随后链)Lagging Strand。

第二节 DNA复制的酶学
复制体系的鉴定
DNA 基因:与DNA 复制有
关的基因
条件型突变体、温度突变
体研究DNA 基因
快停突变体、慢停突变体
1.DNA 聚合酶
3 种klenow 片段
聚合酶I 活性
①5’-3’聚合活性
②3’-5’外切活性
③5’-3’外切活性
聚合酶Ⅲ:主要的复制酶
聚合酶活性

第三节 复制的基本模式
1. θ型
2. 滚环式
3. D 型
第四节 复制过程
一、复制的起始


三、回环模型
在oriC 和oriλ上起始涉及相同的反应
阶段 oriC oriλ
Ori 的识别和解链 DnaA O
解旋酶的结合和解链DnaB DnaB
DnaC P
RNA Pol RNA Pol
释放复合体 DnaJ? DnaJ?
四、线形末端的复制
解决方法:
1. 成环
2. 末端冗余
3. 腺病毒

五、真核DNA 复制
1.DNA 聚合酶

DNA 聚合酶α δ ε β γ
位置核核核核线粒体
功能引发延伸修复,合成修复复制
酶活性Pol I 3‘-5’外切核酸酶3‘-5’外切核酸酶3‘-5’外切核酸酶
2.SV40DNA 复制
(1)RNA 引发,起始DNA 合成
(2)DNAδ延伸
功能 E.coli SV40
起始蛋白 DNA A T
螺旋酶 DNA B T
引发 DNA G Polα
聚合 Pol IIIα Polδ
外切酶活性 Pol IIIε Pol I δ
滑动钳 Pol IIIβ PCNA
单链结合蛋白 SSB RPA
3.端粒酶
端粒 TTGGGG
富含TG 结构,
不同生物重复次数不同
端粒酶性质
真核生物复制过程中的核小
体结构
亲本八聚体
全保留装配
图示详见武汉大学出版社
《分子生物学》第91 页。
图7-23 新产生的组蛋白
八聚体装配的三种模式
图7-24 亲代组蛋白八聚
体和新合成的组蛋白八聚体
与DNA 结合的可能方式,Ⅱ
是正确的。

第五章转录
第一节 原核生物的转录
一、转录的一般概念
1.转录是不对称的
模板链/非模板链;有义链/无义链;
正链/负链;编码链。
病毒的分类:
(1)RNA 病毒:RNA→mRNA(+链病毒);
RNA→互补RNA→翻译(-链病毒)。
(2)DNA 病毒
2.DDRP
3.5’;3’
4.pppA;pppG
5.RNApol 忠实性
6.转录泡
二、RNA 聚合酶
holoenzyme:σ起始因子,核心酶
真核生物三种RNA 聚合酶的特点
RNA Pol 位置产物相对活性对α-鹅膏蕈的敏感性
Pol Ⅰ 核仁 28S,18S,5.8S rRNAs 50%~70% 不敏感
Pol Ⅱ 核质 hnRNA,mRNA,某些snRNAs 20%~40% 高度敏感
Pol Ⅲ 核质 tRNA,5S rRNA,某些snRNAs ~10% 片段特异,中度敏感
转录的抑制剂
抑制剂靶酶抑制作用
利福霉素细菌全酶和β亚基结合,抑制起始
链霉溶菌素细菌核心酶和β亚基结合,抑制起始
放射线素D 真核 PolⅠ 和DNA 结合,阻止延伸
α-鹅膏蕈真核 PolⅡ 和 RNA PolⅡ 结合
三、转录过程
原核生物基因的转录:
启动子高度保守
足迹法突变法硫酸二甲酯法
(足迹法图见下页起始过程左边图)
CAP 位点正调节位点
G 敏感性操纵子
25

起始过程
1. 模板结合,扫描式SCAN
2. 起始识别
3. 活化
4. 进入起始位点
26

延伸
终止
P 因子依赖型终止子
P 因子非依赖型终止子
通读效应
第二节 RNA反转录
64 年:抑制DNA 复制的放
线菌素能抑制RNA 病毒。
逆转录酶RDDP
RDDP RNA 病毒编码
活性: cDNA 制备
乙肝病毒
☆由逆转录病毒基因组中pol 基因
编码。是一种多功能酶。
☆有以RNA 为模板和以DNA 为模板合
成DNA 的DNA 聚合酶活性。
☆需要RNA 或DNA 做引物;
☆有核糖核酸酶 H 的活性(在逆转
录酶的C 端),能从3’→5’和从5’
→3’水解RNA,使RNA 与DNA 的杂
交体分离。逆向转录酶的生物学意义:
1.用于合成cDNA。建立cDNA 文库(cDNA Library),获得基因或探针。
2.与PCR 连用 RT-PCR。

第三节 真核生物基因的转录
真核与原核基因转录的区别:课件讲义第25 页两张表和下表所示:
一、真核生物的启动子
RNA pol Ⅱ
二、启动子特征和转录因子
1. RNA 聚合酶Ⅰ效率最高

2. RNA 聚合酶Ⅱ
3. RNA 聚合酶Ⅲ
基因内启动子/基因外启动子
1. RNA pol Ⅱ
核心元件上游调控元件远端调控区

2. RNA pol Ⅰ

3. RNA pol Ⅲ
第四节 转录后产物加工
一、真核的mRNA
帽子结构
poly A
剪接
编辑

二、基因间隔序列的去除
mRNA;tRNA;rRNA。
实验证据:
三、tRNA

 

(责任编辑:泉水)
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