RNA的抽提_生物行

RNA的抽提

将器皿浸泡于0.1% DEPC溶液中12小时，70-80℃烘烤干燥，103.4kPa，121℃高压灭菌15分钟，再70-80℃烘烤干燥即可使用。

将超低温保存的组织材料除去样品袋, 放在2层乳胶手套中，迅速用锤子敲成碎块，称重。称取一定量的组织在干烤过的陶瓷碾钵中用杵子不断碾磨组织，期间用液氮始终使组织保持冻结。将组织彻底碾碎，直至成粉末状。将粉末转入冰预冷的匀浆器中，加入溶液D（每克组织加10ml溶液D，以下均以每克组织计），匀浆至透清。

将匀浆液均匀分装入用冰预冷的50 ml离心管中，向每管组织匀浆液中顺序加入：1ml 2 mol/L NaAc(pH 4.0)，10 ml水饱和酚，2ml氯仿-异戊醇（49:1），充分混匀后用力震荡离心管10 s(溶液充分乳化，成乳白状，无分相现象)，冰浴15 min。

对组织匀浆液进行4℃、10,000×g、20min离心，小心吸取上清，吸的时候注意不要吸动界面的DNA和蛋白，加入等体积预冷至-20℃的异丙醇,混匀后-20℃放置1小时；

4℃、14,0005g、20 min离心，弃上清，短暂离心，吸干所有上清；将沉淀溶于2ml溶液D中，用等体积的酚-氯仿、氯仿-异戊醇（49:1）各抽提一遍。

加等体积的预冷至-20℃异丙醇，混匀后置-20℃沉淀2小时。　

4℃、13,600×g离心20min，弃上清，用预冷至-20℃的75%乙醇洗涤沉淀三次。将沉淀于室温晾干，溶于400μlDEPC处理过的ddH2O中。

取1μl溶液于1.2%琼脂糖凝胶中电泳检测，并用分光光度计检测OD260, OD280，OD230的吸收值。

(责任编辑：泉水)

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