原作者:[标签:作者] 添加时间:2008-09-17 原文发表:2008-09-17 人气:30 一、探针的类型 核酸分子探针是指用放射性核素或其他标记物标记的、能与特定的靶分子发生特异性相互作用的DNA或RNA片段。 1.基因组DNA探针:病毒DNA等 2.cDNA探针;最常用 3.寡核苷酸探针:10-50bp,测序、点突变 4.RNA探针:稳定性高、特异性强,但RNA极易降解,不宜操作。二、探针的标记物理想的标记物:敏感度高;特异性强;不影响探针分子的主要理化特性;标记、检测方法简单、探针保存时间长;对环境无污染、对人体无损害;价格低廉。 一)放射性标记物 二)非放射性标记物(一)放射性标记物——放射性核素 利用放射性核素能产生射线的特性将核素标记在核酸合成所必需的NTP或dNTP上,通过一定方法掺入到DNA或RNA中去制成探针,与待测的核酸杂交后,核素产生的或射线可使底片感光的特性,通过放射自显影的方法进行检测。 产生射线的核素:32P、3H、35S 产生射线的核素:125I 1、常用的放射性核素 1)32P:产生射线,灵敏度高,分辨率强,是最常用的放射性标记物,但半衰期短(14。3天):位和位标记。 2)35S:分辨率高、半衰期长(87.1天)。敏感度底 2、放射性标记物的优缺点优点:灵敏度高:0.01pg 特异性强 缺点:放射性污染 成本高、半衰期短,不能长期保存二)非放射性标记物 1、优缺点 优点:无放射性污染,成本低、操作简单 缺点:敏感性、特异性均低于放射性核素2、常用的标记物 1)生物素:1-2pg 生物素化核苷酸:bio-16-dUTP bio-11-dUTP 生物素化核苷酸----通过酶触反应掺入到DNA中去制成探针----杂交----抗生物素蛋白-生物素-酶的复合物—加底物—显色 光敏生物素:生物素与光敏基团结合----光敏生物素-----光敏生物素与核酸探针混合----在强光的作用下----光敏基团与核酸共价结合---生物素标记的探针生物素化的核苷酸和光敏生物素 2)地高辛甙元Dig-dUTP-----通过酶触反应掺入到DNA中去制成探针----杂交----加抗地高辛-酶的复合物—加底物—显色 灵敏度较高:0.1pg 特异性较生物素高 是较理想的非放射性标记物三、探针的标记方法 (一)缺口翻译法或切口平移(nicktranslation) • 噬菌体展示技术的原理及应用• 核酸抽提的基础现状• 质粒与载体• 分子克隆小教程(Molecular Cloning)• 基因差异表达技术• 微阵列分析与基因差异表达• 基因表达差异分析方法进展• 差异表达基因克隆技术的新进展• 新的测序策略--全基因组鸟枪法测序• 酶切扩增多态性序列(C1eaved Amplified Po• DNA测序常见问题分析及解决办法总结• 阅读质粒图谱• 测序常见问题分析• 限制性内切酶的一般原则和建议(General Gu• 简单序列长度多态性(SSLP)和间简单序列重• 植物基因组DNA提取、酶切及电泳分析• 细菌基因组DNA提取方法综述• 小鼠肝基因组DNA制备• 碱裂解法制备大肠杆菌质粒(Alkaline Lysis• 核酸提取(The Extraction of Nucleic Acid) (责任编辑:glia) |