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核酸探针标记(label of nuclei acid probe )

时间:2010-09-13 03:47来源: 作者: 阅读:
原作者:[标签:作者] 添加时间:2008-09-17 原文发表:2008-09-17 人气:30
一、探针的类型
核酸分子探针是指用放射性核素或其他标记物标记的、能与特定的靶分子发生特异性相互作用的DNA或RNA片段。
1.基因组DNA探针:病毒DNA等
2.cDNA探针;最常用
3.寡核苷酸探针:10-50bp,测序、点突变
4.RNA探针:稳定性高、特异性强,但RNA极易降解,不宜操作。二、探针的标记物理想的标记物:敏感度高;特异性强;不影响探针分子的主要理化特性;标记、检测方法简单、探针保存时间长;对环境无污染、对人体无损害;价格低廉。
一)放射性标记物
二)非放射性标记物(一)放射性标记物——放射性核素
利用放射性核素能产生射线的特性将核素标记在核酸合成所必需的NTP或dNTP上,通过一定方法掺入到DNA或RNA中去制成探针,与待测的核酸杂交后,核素产生的或射线可使底片感光的特性,通过放射自显影的方法进行检测。
产生射线的核素:32P、3H、35S
产生射线的核素:125I
1、常用的放射性核素
1)32P:产生射线,灵敏度高,分辨率强,是最常用的放射性标记物,但半衰期短(14。3天):位和位标记。
2)35S:分辨率高、半衰期长(87.1天)。敏感度底

2、放射性标记物的优缺点优点:灵敏度高:0.01pg
特异性强
缺点:放射性污染
成本高、半衰期短,不能长期保存二)非放射性标记物
1、优缺点
优点:无放射性污染,成本低、操作简单
缺点:敏感性、特异性均低于放射性核素2、常用的标记物
1)生物素:1-2pg
生物素化核苷酸:bio-16-dUTP
bio-11-dUTP
生物素化核苷酸----通过酶触反应掺入到DNA中去制成探针----杂交----抗生物素蛋白-生物素-酶的复合物—加底物—显色
光敏生物素:生物素与光敏基团结合----光敏生物素-----光敏生物素与核酸探针混合----在强光的作用下----光敏基团与核酸共价结合---生物素标记的探针生物素化的核苷酸和光敏生物素


2)地高辛甙元Dig-dUTP-----通过酶触反应掺入到DNA中去制成探针----杂交----加抗地高辛-酶的复合物—加底物—显色
灵敏度较高:0.1pg
特异性较生物素高
是较理想的非放射性标记物三、探针的标记方法
(一)缺口翻译法或切口平移(nicktranslation)
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(责任编辑:glia)
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