生物素标记寡核苷酸探针原位检测石蜡切片鸭瘟病毒核酸

【文　摘】据GenBank中有关鸭瘟病毒（DPV）的1个765bp的EcoR I片段序列，用Oligo软件设计长度为37bp的寡核苷酸并用生物素标记制备探针，经blast分析和斑点杂交检测探针的特异性后，建立从石蜡切片中检测出DPV核酸的原位杂交方法并对人工感染死亡鸭的各组织器官进行检测，结果显示：（1）寡核苷酸探针能特异性检测到DPV强毒CHv株DNA，对鸭病毒性肝炎病毒QL79株RNA、血清1型鸭疫里默氏杆菌DNA、鸭源多杀性巴氏杆菌DNA、鸭沙门菌DNA和大肠杆菌DNA的检测结果为阴性。（2）以寡核苷酸探针建立的从石蜡切片中检测出DPV核酸的原位杂交方法的最佳反应条件为：组织切片先用O．2mol／LHCI37℃处理20min，然后用100mg／L的蛋白酶K37℃消化15min左右；杂交时探针工作浓度为350μg／L；Avidin-AP的工作稀释度为1：100。（3）以所建立的原位杂交法检测DPV-CHv强毒人工感染死亡鸭的各组织器官，结果肝脏、肠道、法氏囊、脾脏、食道、肺脏扣肾脏呈阳性反应，DPV的DNA分布于特定细胞的细胞浆和细胞核。结果表明，原位杂交检测石蜡切片中DPV的方法具有直观、特异性强的优点，是对DPV进行检测和病原定位的良好方法，可用于DPV的侵染过程和致病机理研究及回顾性诊断检测。 (责任编辑：glia)

搜索

热门标签:

生物素标记寡核苷酸探针原位检测石蜡切片鸭瘟病毒核酸