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流式细胞仪实验方法(9)

时间:2005-04-05 13:16来源:本站原创 作者:bioguider 阅读:


CD单抗 代表性单抗 识别的膜糖蛋白   
CD36 5F1,CIMeg1,ESIVC7 GPIV   
CD41 PAC1,7E3,PBM6.4 GPⅡb/Ⅲa和GPⅡb   
CD42a FMC25,BL-H6,GR-P GPⅠ   
CD42b PHN89,AN51,GN287 GPⅠ   
CD61 Y215,CLB-thromb/1 GPⅢa   
CD62 CLB-thromb/6,RUU-SP1.18.1 P-selectin或GMP140   
CD63 RUU-SP2.28,CLB-gran/12 GP53 


三、操作步骤
标本采集:
枸橼酸钠抗凝的真空采血管顺序编号。
抽取静脉血,采血管中注入2ml。
于10分钟之内完成血小板激活和染色步骤,操作时应注意减少人工激活。
血小板激活:
试管内加入50mlADP(也可选用其他激活剂,如PMA、纤维蛋白、TRAP),450ml全血,轻轻摇匀。
室温孵育5分钟。
立即染色。
荧光抗体染色:
Falcon管编号。
在对照管中加入同型对照、CD61、PAC-1和RGDS(PAC-1的阻断剂)。
在试验管中加入CD62P、CD61和PAC-1。
在对照管和试验管中各加入未激活或激活的血标本5ml。
轻轻混匀,室温暗处孵育15-20分钟。
各管中加入1ml冷的固定液 (2-8°C),充分混匀, 2-8°C阴暗处放置30分钟。
24小时内上机分析。
结果分析:
在CD61 vs SSC点图中设门找血小板群。 CD61 vs SSC 点图显示有三群,
CD61阳性/低SSC一群主要由单个血小板组成,CD61阳性/高SSC一群主要由黏附血小板的血细胞组成, CD61阳性/散射光更低的一群主要由血小板来源的
碎片组成。由于在生理和病理情况下,血小板群和红细胞群的大小、颗粒度会有交叉,因此,不建议使用FSC-SSC图设门。 在CD61 vs SSC点图中找出CD61 阳性的血小板群 (单个血小板和黏附在WBC上的血小板),设门。


四、注意事项
采血时请用大号针管,抽出的前2ml血应弃去不用。
尽量避免标本受到物理振动。
取血后10分钟内完成染色操作。
在Falcon管中加血标本5ml,管壁上不能有残留血,未染色的部分会影响试验结果。
为了检测和控制血小板体外激活,建议使用正常未受激活的血标本平行做质量控制。

(责任编辑:泉水)
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