细胞免疫化学:免疫酶标技术 1) 直接法 1.标本固定。 2.PBS洗涤2×3分钟。 3.1% H2O2(或1% H2O2 甲醇)抑制内源性过氧化物,室温10~20分钟。 4.正常血清(1:10)孵育,室温20分钟。 5.滴加酶标记的抗体37℃1小时或4℃过夜。 6.PBS洗涤3×3分钟。 7.DAB+H2O2显色5~10分钟,镜下控制染色结果。DAB+H2O2应用前15分钟配制。 8.充分水洗后,复染、脱水、透明、封片、镜检。
2) 间接法 1.标本固定。 2.PBS洗涤2×3分钟。 3.1%H2O2(或1%H2O2 甲醇)抑制内源性过氧化物,室温10~20分钟。 4.正常血清(1:10)孵育,室温20分钟。 5.滴加第一抗体,37℃1小时或4℃过夜。 6.PBS洗涤3×3分钟。 7.滴加酶标二抗,室温1小时。 8.PBS洗涤3×3分钟。 9.0.04%DAB+0.03 %H2O2显色5~10分钟。 10. 充分水洗后,复染、脱水、透明、封片、镜检。
3) PAP法(过氧化物酶抗过氧化物酶抗体复合物法) 1.标定固定后,PBS洗涤。 2.1%H2O2(或1%H2O2 甲醇)阻断内源性过氧化物,室温10~20分钟。 3.PBS洗涤2×3分钟。 4.正常血清(二抗的正常血清)孵育,室温20分钟。 5.滴加一抗,室温1小时或4℃过夜。 6.PBS洗涤3×3分钟。 7.滴加二抗,室温30分钟。 8.PBS洗涤3×3分钟。 9.加PAP复合物,室温60分钟。 10. PBS洗涤3×3分钟。 11. 0.04%DAB+0.03% H2O2显色5~10分钟。 12. 充分水洗。 13. 苏木精复染,封片观察。
4) 双PAP法 1~10同单PAP法。 11. 二次加酶标二抗。 12. PBS洗。 13. 二次加PAP。 14. PBS洗。 15. 0.04%DAB+0.03 %H2O2显色5~10分钟。 16. 苏木精复染核,封片,镜检。
5) ABC法(卵白素-生物素-过氧化物酶复合物法) 1~8同PAP法 9)加ABC液,室温60分钟。 10) PBS洗。 11) 0.04%DAB+0.03% H2O2显色5~10分钟。 12) 充分水洗。 13) 苏木精复染核,封片,镜检。 (责任编辑:泉水) |