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细胞免疫化学:免疫酶标技术

时间:2005-04-05 14:41来源:本站原创 作者:bioguider 点击: 1397次

细胞免疫化学:免疫酶标技术

1)  直接法

1.标本固定。

2.PBS洗涤2×3分钟。

3.1% H2O2(或1% H2O2 甲醇)抑制内源性过氧化物,室温10~20分钟。

4.正常血清(1:10)孵育,室温20分钟。

5.滴加酶标记的抗体37℃1小时或4℃过夜。

6.PBS洗涤3×3分钟。

7.DAB+H2O2显色5~10分钟,镜下控制染色结果。DAB+H2O2应用前15分钟配制。

8.充分水洗后,复染、脱水、透明、封片、镜检。

2)  间接法

1.标本固定。

2.PBS洗涤2×3分钟。

3.1%H2O2(或1%H2O2 甲醇)抑制内源性过氧化物,室温10~20分钟。

4.正常血清(1:10)孵育,室温20分钟。

5.滴加第一抗体,37℃1小时或4℃过夜。

6.PBS洗涤3×3分钟。

7.滴加酶标二抗,室温1小时。

8.PBS洗涤3×3分钟。

9.0.04%DAB+0.03 %H2O2显色5~10分钟。

10.  充分水洗后,复染、脱水、透明、封片、镜检。

3)  PAP法(过氧化物酶抗过氧化物酶抗体复合物法)

1.标定固定后,PBS洗涤。

2.1%H2O2(或1%H2O2 甲醇)阻断内源性过氧化物,室温10~20分钟。

3.PBS洗涤2×3分钟。

4.正常血清(二抗的正常血清)孵育,室温20分钟。

5.滴加一抗,室温1小时或4℃过夜。

6.PBS洗涤3×3分钟。

7.滴加二抗,室温30分钟。

8.PBS洗涤3×3分钟。

9.加PAP复合物,室温60分钟。

10.  PBS洗涤3×3分钟。

11.  0.04%DAB+0.03% H2O2显色5~10分钟。

12.  充分水洗。

13.  苏木精复染,封片观察。

4)  双PAP法

1~10同单PAP法。

11.  二次加酶标二抗。

12.  PBS洗。

13.  二次加PAP。

14.  PBS洗。

15.  0.04%DAB+0.03 %H2O2显色5~10分钟。

16.  苏木精复染核,封片,镜检。

5)  ABC法(卵白素-生物素-过氧化物酶复合物法)

1~8同PAP法

9)加ABC液,室温60分钟。

10)  PBS洗。

11)  0.04%DAB+0.03% H2O2显色5~10分钟。

12)  充分水洗。

13)  苏木精复染核,封片,镜检。

(责任编辑:泉水)
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