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抗体的制备方法与原理(3)

时间:2005-04-06 14:34来源:本站原创 作者:bioguider 阅读:

用于常规免疫学实验

可用

单抗组合应用

抗原抗体形成格子结构(沉淀反应)

容易形成

一般难形成

抗原抗体反应

抗体混杂,形成2分子反应困难,不可逆

可形成2分子反应,可逆

  

[NextPage]

单克隆抗体的制备方法如下。
  (一)动物的选择与免疫
  1.动物的选择  纯种BALB/C小鼠,较温顺,离窝的活动范围小,体弱,食量及排污较小,一般环境洁净的实验室均能饲养成活。目前开展杂交瘤技术的实验室多选用纯种BALA/C小鼠。
  2.免疫方案   选择合适的免疫方案对于细胞融合杂交的成功,获得高质量的McAb至关重要。一般在融合前两个月左右根据确立免疫方案开始初次免疫,免疫方案应根据抗原的特性不同而定。
  (1)可溶性抗原免疫原性较弱,一般要加佐剂,半抗原应先制备免疫原,再加佐剂。常用佐剂:福氏完全佐剂、福氏不完全佐剂。
  初次免疫 抗原1~50μg加福氏完全佐剂皮下多点注射或脾内注射(一般0.8~1ml,0.2ml/点)
  ↓3周后
  第二次免疫 剂量同上,加福氏不完全佐剂皮下或ip(腹腔内注射)(ip剂量不宜超过0.5ml)
  ↓3周后
  第三次免疫 剂量同一,不加佐剂,ip(5~7天后采血测其效价)
  ↓2~3周
  加强免疫,剂量50~500μg为宜,ip或iv(静脉内注射)
  ↓3天后
  取脾融合
  目前,用于可溶性抗原(特别是一些弱抗原)的免疫方案也不断有所更新,如:①将可溶性抗原颗粒化或固相化,一方面增强了抗原的免疫原性,另一方面可降低抗原的使用量。②改变抗原注入的途径,基础免疫可直接采用脾内注射。③使用细胞因子作为佐剂,提高机体的免疫应答水平,增强免疫细胞对抗原的反应性。
  (2)颗粒抗原免疫性强,不加佐剂就可获得很好的免疫效果。以细胞性抗原为例,免疫时要求抗原量为1~2×107个细胞。
  初次免疫 1×107/0.5ml ip
  ↓2~3周后
  第二次免疫 1×107/0.5ml ip
  ↓3周后
  加强免疫(融合前三天)1×107/0.5ml ip或iv
  ↓
  取脾融合
  (二)细胞融合
  1.细胞融合前准备
  (1)骨髓瘤细胞系的选择:骨髓瘤细胞应和免疫动物属于同一品系,这样杂交融合率高,也便于接种杂交瘤在同一品系小鼠腹腔内产生大量McAb。常用的骨髓瘤细胞系见表2-4。
表2-4用于融合试验的主要骨髓瘤细胞系

(责任编辑:泉水)

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