HEK 293细胞（人胚肾上皮细胞）是生物医学研究中常用的细胞系，广泛应用于蛋白表达、病毒包装及信号转导研究。以下为含血清培养的标准操作流程。 试剂准备 培养基：
500 ml DMEM（Gibco #41966-029）
55 ml 胎牛血清（FCS，10%）
2.8 ml 庆大霉素溶液（Sigma G-1272，10 ml） 胰蛋白酶：
10×冻干胰蛋白酶（Gibco 25095-019） Versene溶液：
1:5000 Versene（Gibco 15040-033，100 ml） 取2瓶（2×100 ml）Versene，从每瓶吸取10 ml加入冻干胰蛋白酶瓶中溶解。然后将胰蛋白酶溶液分装回每瓶Versene中，每瓶10 ml。 PBS（磷酸盐缓冲液） 操作步骤 从冻存管复苏细胞：
将培养基在37°C预热，向两个培养瓶中加入适量培养基（150 cm²瓶加25 ml，25 cm²瓶加5 ml）。快速在37°C水浴中解冻细胞，将细胞悬液以两种密度分别接种至培养瓶中。12小时后或待细胞贴壁后更换培养基。 细胞传代：
吸去培养瓶中的培养基。用PBS小心洗涤细胞以去除残留血清。向150 cm²培养瓶中加入1-2 ml胰蛋白酶溶液（室温平衡），37°C孵育1-2分钟直至细胞脱落。准备一个新的培养瓶，加入新鲜培养基。加入几毫升培养基终止胰蛋白酶消化。取适量细胞悬液接种至新培养瓶。通常，当融合的HEK 293细胞按1:10比例传代时，2-3天后可再次达到融合。 (责任编辑：泉水) |