多重pCR快速检测食品中肠出血性大肠杆菌
时间:2006-09-22 00:29 来源:科技日报 作者:admin 点击:次
| 该项研究首先是无菌操作取一定量的样品（固体样品用均质器打碎）加入到肠道增菌肉汤中（含20μg/ml新生霉素），37℃振荡培养4—6h；使用DNA提取试剂盒，用快速裂解吸附法制备DNA模板；设计三对引物即公认的EHEC毒力因子基因序列—肠上皮细胞纤毛消除素基因eaeA、溶血素基因hlyAB、志贺样毒素基因slt1/2；用四种脱氧核苷三磷酸(dNTPS)作为合成DNA片段的原料；在耐热DNA聚合酶的作用下，在合适的离子、缓冲液及温度条件下催化合成DNA，并保证反应的产量和质量；最后用1.5%%的琼脂糖凝胶电泳分离，紫外检测仪检测扩增产物。利用该方法检测食品中EHEC时，从样品增菌培养到整个检测过程结束不超过8小时，方法的检出限≦1.6cfu/g(ml)。表明该方法是一种特异性强、敏感性高、省时、省力的简便、快速EHEC检测方法，它不仅缩短了检测时限而且极大提高了检验的准确性。应用该方法可绘制不同来源的细菌菌株的DNA图谱，从而确定同源性及原因食品，进而追踪传播途径，确定流行范围，对制定食物中毒的预防和控制对策有着重要的参考价值。 (责任编辑：泉水) |
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