RNA干扰技术原理
近年研究表明，将双链RNA(dsRNA)导入细胞可特异性降解同源mRNA，实现基因沉默。这种转录后基因调控机制称为RNA干扰(RNAi)，其核心过程包括： 一、分子机制
1. 起始阶段：Dicer酶将dsRNA切割为21-23nt的siRNA片段
2. 效应阶段：siRNA与RISC复合体结合，引导mRNA降解
3. 表观调控：启动子区dsRNA可诱导DNA甲基化沉默基因 二、实验操作
(一)siRNA设计
• 靶序列筛选原则：AA(N19)序列，GC含量45-55%
• 需避开UTR区域，通过BLAST排除脱靶风险
• 必须设置序列打乱的阴性对照 (二)制备方法
1. 化学合成：高纯度但成本昂贵
2. 体外转录：经济高效适合筛选
3. RNase III消化：快速获得siRNA混合物
4. 载体表达：适合长期基因沉默研究
5. PCR表达框：快速筛选最优序列 (三)转染技术
• 脂质体转染（最常用）
• 电穿孔法（高效率但毒性大）
• 病毒载体（稳定长效表达） 三、应用前景
• 基因功能研究的高效工具
• 信号通路解析的新方法
• 基因治疗潜在策略（抗病毒、抗肿瘤） (责任编辑：泉水) |