4．特异性强免疫金探针的非特异性吸附作用小，较少受生物组织背景因素的影响，在抗原或抗体的检测中显示出高度的特异性。

　　5．敏感性高由于金颗粒的电子密度很大特别适合透射电镜及扫描电镜，因此，免疫金银法用于电镜，其检测抗原或抗体率远远超过酶反应物，从而大大改进了免疫细胞化学技术在电镜水平上的分辨率。光镜下金颗粒经过银显影后得到放大，用于检测组织细胞抗原时其敏感性比PAP法高200倍。我们检测肝炎表面抗原时比ABC法高6倍，是至今为止最为敏感的免疫细胞化学方法，特别适合于检测微量抗原及石蜡切片标本中的微弱抗原。

　　应用彩色IGSS和IGSS双标及多标记，可在同一张切片上检测两种以上的抗原成份。胶体金可以制备成不同大小的颗粒，将不同直径的胶体金分别标记不同的抗体或抗原，可以在同一张标本上同时区分出两种或两种以上的抗原或抗体，非常适用于电镜水平的双标和多标记，为研究细胞内抗原及多种抗原的表达及各种抗原分子相互之间的关系等提供了最佳手段。

　　免疫金银技术是新兴的科学技术，目前许多实验室越来越广泛地采用这一新技术，从而使它的发展有了扎实的基础。用免疫荧光、免疫酶技术、放射免疫技术可做的工作，均可使用免疫金银技术。另外，这一新的方法在其它技术的配合下不断地得到更新与进步，使它能经常增添新的内容，特别是免疫金和胶体金示踪作为一门独特的新技术将在生物医学及其它领域的研究中发挥着越来越大的作用。

　　五、在IGSS染色中常见技术问题和对策

　　（一）背景染色产生的原因和防止方法

　　（1）第一抗体或金标抗体稀释度不合适，一般容易犯抗体使用过浓的毛病，认为抗体越浓越好，结果适得其反。应该先作方阵滴定，优选最佳稀释倍数（见第一章　），即可避免非特异性染色，又可节　省抗体。

　　（2）使用正常箅清封闭和在抗体稀释液中加入牛血清白蛋白，可以减少非特异吸附，降低背景染色。

　　（3）显色的器皿必须彻底清洗，化学试剂必需用三蒸馏水配制。

　　（4）乳酸银和硝酸银的显色在避光的环境中反应。醋酸银则可在有光的环境中显色。

　　（5）显色时切片应垂直放置在银显影液中，使过多的银颗粒下沉，如水平放置易沉淀于切片上。

　　（6）控制反应时间，显影液加入适量的阿拉伯胶或明胶可以延缓反应速度，避免形成过多的还原银，非特异地吸附在切片上。一般加入明胶1%～2%，效果比较满意，反应时间根据室温而定，室温25^℃左右显色时间10～15min，室温在20℃以下，显色时间20～30min左右。

　　（7）洗涤：使用TBS时最好加入0.05%～0.1%的Triton X-100或Tween 80，可以洗脱掉组织表面发生非特异性吸附的污染蛋白，防止出现背景的非特异染色。

　　（二）背景染色已发生应如何消除

　　（1）2%硫代硫酸钠，1%铁氰化钾等量混合，加在切片上至背景无色为止。

　　（2）2%铁氰化钾和1%溴化钾等量混合作用1min水冲洗，然后加上2%硫代硫酸钠和1%亚硫酸钠脱色，至背景干净为止。

　　（3）0.1%重铬酸钾加0.25%浓硫酸，在显微镜下控制脱色时间，至阳性结果清楚，无背景为止。然后用5%硫代硫酸钠漂白。注意时间不要过长，以免阳性结果被脱掉。

　　（4）用0.3%～1%的H₂O₂ 处理切片也可消除背景的银颗粒。但必须在显微镜下控制脱水时间，防止把阳性结果脱色。

　　（三）彩色显影背景过染的处理方法

　　彩色免疫金银法，在胶体金技术中是一个很大的突破，它的优点是结果鲜明，对比度好，但是在彩色显影过程中时间过长，背景可有一些着色，彩色显影的时间控制很重要。一旦过染可用以下方法处理。

　　（1）纯酒精滴到切片上3～5s,立即冲掉，水洗，充分地把酒精洗掉，如果洗不彻底，造成阳性结果脱色。

　　（2）75%的酒精滴到切片上1min，立即冲掉，脱色不能时间过长，过长后阳性结果全部脱掉。

　　六、物理显影液及缓冲液的配制

　　（一）缓冲液的配制

　　（1）0.05mol/l pH7.4 TBS 配制

　　Tris（三羟甲基胺基甲烷）12.1g

　　NaCl 　　　　　　　　　　17.5g

　　加双蒸水　　　　　　　　1900ml

　　然后用浓HCL调至pH为7.4再加双蒸水至2000ml

　　Tris 　　　　　　　4.84g

　　NaCl 　　　　　　　17.5g

　　BSA 　　　　　　　　2.0g

　　NaN₃ 1.0g

　　双蒸水1900ml,充分搅拌至溶质完全溶解,用浓HCl调pH至8.2,再加双蒸水至2000ml。

　　（二）银显影液的配制

　　1．乳酸银显影液的配制：混合以下溶液

　　①10%阿拉伯胶水溶液60ml

　　②枸橼酸缓冲液pH 3.5 10ml

　　③对苯二酚1g,加双蒸水20ml溶解。

　　④乳酸银水溶液100 mg加水10ml。

　　注意在暗处显影。

　　2．硝酸银显影液的配制

　　①10%阿拉伯胶水溶液60ml。枸橼酸缓冲液ph 3.5 10ml

　　②对苯二酸1.7g水溶液30ml。

　　③硝酸银40mg水溶液2ml。

　　①②两溶液完全溶解，临用前加入硝酸银溶液。在暗处显影。

　　4．彩色显影液的配制

　　①0.2N氢氧化钠的异丙醇溶液5ml溶入100mgα-萘酚（或菲尼酮）。

　　②500mg碳酸钠，25mg溴化钾，50mg亚硫酸钠，加双蒸水25ml。

　　①②两液1：10混合，室温下彩色显影。

　　5．醋酸银显影液

　　①15%阿拉伯胶60ml，柠檬酸缓冲液10ml，pH3.5。

　　②对苯二酚1.7g溶于20ml蒸馏水中。

　　③醋酸银100mg溶于蒸馏水10ml中。

　　用前①②③依次混合，不需要避光，在室温下显影。

　　（三）柠檬酸缓冲液的配制

　　柠檬酸（C₆H₈O₇.H₂O）25.5g

　　柠檬酸三钠（Na₃C₆H₅O₇.2H₂O）23.5g

　　加重蒸水100ml溶解即成，pH3.5

　　(四)氢氧化钠（NaOH）无水乙醇饱和溶液的配制　

　　8g氢氧化钠，加入100ml无水乙醇振摇溶解即成。