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制备染色体扩散

2006-07-24 14:11 未知 未知 阅读 0
核心摘要: 本文介绍了制备染色体扩散的实验步骤和注意事项,包括细胞培养、Colcemid处理、固定和染色等过程。

描述

制备染色体扩散是一种常见的细胞遗传学实验技术,用于观察和分析细胞的染色体结构和行为。

实验步骤

1. 将细胞培养物暴露在Colcemid(注意:见提示#1)中,以阻止细胞进入有丝分裂阶段(见提示#2)。

2. 去除含有Colcemid的培养基。

3. 添加15ml 75mM KCl,允许细胞在37°C下膨胀20-25分钟。

4. 去除KCl溶液。

5. 添加15ml固定剂,并在4°C下孵育细胞12-24小时以固定。

6. 将2-3滴细胞/固定剂溶液滴到冷的ddH2O覆盖的玻片上。

7. 允许玻片空气干燥,并在光学显微镜下观察或准备免疫荧光染色。

配方

75mM KCl

固定剂:3:1 甲醇:乙酸

材料

提示

1. 注意:Colcemid是一种生物危害物质,请参考其MSDS以获取正确的处理说明。

2. Colcemid的用量和孵育时间将取决于细胞类型(一个好的起始点是大约0.1μg Colcemid在10-50ml细胞培养物中,孵育1-4小时)。

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