描述
制备染色体扩散是一种常见的细胞遗传学实验技术,用于观察和分析细胞的染色体结构和行为。
实验步骤
1. 将细胞培养物暴露在Colcemid(注意:见提示#1)中,以阻止细胞进入有丝分裂阶段(见提示#2)。
2. 去除含有Colcemid的培养基。
3. 添加15ml 75mM KCl,允许细胞在37°C下膨胀20-25分钟。
4. 去除KCl溶液。
5. 添加15ml固定剂,并在4°C下孵育细胞12-24小时以固定。
6. 将2-3滴细胞/固定剂溶液滴到冷的ddH2O覆盖的玻片上。
7. 允许玻片空气干燥,并在光学显微镜下观察或准备免疫荧光染色。
配方
75mM KCl
固定剂:3:1 甲醇:乙酸
材料
提示
1. 注意:Colcemid是一种生物危害物质,请参考其MSDS以获取正确的处理说明。
2. Colcemid的用量和孵育时间将取决于细胞类型(一个好的起始点是大约0.1μg Colcemid在10-50ml细胞培养物中,孵育1-4小时)。