背景介绍

IC50（半最大抑制浓度）是药物筛选与评价过程中常用的指标，能够反映药物对目标细胞或病原体的抑制效力。该指标在抗疟疾药物开发、抗肿瘤药物筛选等领域具有重要意义。本文详细介绍了利用[3H]次黄嘌呤摄取法测定IC50的标准操作流程，适用于红细胞培养体系，尤其针对疟原虫（Plasmodium falciparum）感染的红细胞。

实验步骤

1. 在96孔板中，每孔分配25 μl完整RPMI培养基，针对每种药物浓度设置三重复孔。
2. 每孔加入25 μl待测药物溶液，浓度范围为1-10 μM。
3. 向所有孔中加入200 μl感染疟原虫的红细胞悬液（血细胞比容1.7%）。
4. 在37℃孵育24小时。
5. 每孔加入25 μl [3H]次黄嘌呤（0.5 mCi）溶液。
6. 再次孵育18小时。
7. 使用MASH型收集器收获细胞，滤纸条晾干后剪下滤盘，置于闪烁瓶中加入闪烁液。
8. 用液体闪烁计数器测定放射性活性。
9. 将浓度-反应数据输入计算机，采用非线性回归分析（Rodhard等，1980）拟合S型曲线，计算IC50值。
10. 在同一板中设置无药对照孔及未感染红细胞对照孔以校正背景。

实验注意事项

实验过程中需严格控制温度、时间及各组分体积，确保数据准确可靠。放射性操作需遵循安全规范。

参考文献

Rodhart, D., et al. (1980). Non linear regression analysis for concentration-response data.