描述

本研究探讨了抗体中和干扰素γ（IFN-γ）对L929小鼠成纤维细胞系和A549人肺癌细胞系病毒感染的保护作用。通过MTT法检测细胞活性，评估抗体中和效果。

材料与方法

材料：L929小鼠成纤维细胞系（ATCC编号：CCL-1）或A549人肺癌细胞系（ATCC编号：CCL-185）、培养基（RPMI补充10%胎牛血清）、检测培养基（RPMI补充2%胎牛血清）、96孔平底培养板（Costar编号：3595）、EMC病毒（107 pfu/ml，-80℃保存）、MTT溶液（Sigma编号：M5655，5 mg/ml，PBS配制，避光保存）、MTT裂解液（20% SDS/50% DMF）。

仪器：移液器及移液枪、湿化培养箱、96孔微孔板分光光度计。

实验步骤：

1. 将L929或A549细胞以3.5×105/ml密度悬浮于检测培养基中，每孔加入100 μl至96孔检测板，37℃、5% CO2湿化培养箱中孵育过夜。

2. 在另一稀释板每孔加入50 μl检测培养基。

3. 将功能性抗细胞因子抗体在稀释板中进行2倍系列稀释（第3行至第12行），第1行和第2行留空（对照）。

4. 从第2行至第12行加入50 μl样品和重组细胞因子（浓度参见快速指南表），第1行留空（仅细胞）。

5. 稀释板在37℃、5% CO2湿化培养箱中孵育2小时。

6. 将50 μl Ab/Ag混合液转移至含细胞的检测板对应孔中。

7. 检测板孵育6小时。

8. 小心吸去上清，每孔加入100 μl EMC病毒溶液（1-4×104 pfu/ml，人IFN-γ：107 pfu/ml原液1/250稀释；小鼠IFN-γ：107 pfu/ml原液1/1000稀释）。

9. 37℃、5% CO2湿化培养箱中孵育40小时。

10. 每孔加入10 μl 5 mg/ml MTT溶液，孵育4小时。

11. 每孔加入50 μl MTT裂解液，孵育过夜。

12. 在570-650 nm波长下读取吸光度。

13. 绘制标准曲线并分析数据。