描述:本实验旨在研究抗TLR4/MD2中和脂质A诱导的小鼠腹腔细胞因子生成。实验步骤包括:准备小鼠腹腔细胞并将其以2x10^6/ml的浓度分装到24孔培养板中,每孔1ml;预先与20μg/ml的MTS510或同型对照抗体孵育细胞0.5-1小时;然后加入5ng/ml的脂质A;继续在37℃、5% CO2的湿润培养箱中孵育16-24小时;收集培养上清液,使用ELISA试剂盒检测IL-6或TNF-α的表达水平。
所需材料:
1. 硫代乙醇酸盐诱导的小鼠腹腔细胞悬液
2. 培养基(RPMI,含10% FBS)
3. 24孔平底培养板(Costar,目录号3526)
4. 功能级抗小鼠TLR4/MD2单克隆抗体,克隆号MTS510(目录号16-9924)
5. 功能级大鼠IgG2a同型对照(目录号16-4321)
6. 脂质A(Sigma,目录号L-0774)
7. eBioscience小鼠IL-6或TNF-α Ready-SET-Go ELISA试剂盒(目录号分别为88-7064和88-7324)
实验时间:
1小时实验准备
16-24小时孵育
ELISA检测所需时间