实验室器皿的洗涤与消毒是确保实验准确性和安全性的基础操作。本文系统介绍了玻璃器皿、胶塞、塑料器皿的清洗方法,以及紫外线、湿热、滤过三种消毒方式的适用范围与注意事项。
一、玻璃器皿的洗涤
(一)浸泡:新瓶使用前应先用自来水简单刷洗,然后用5%稀盐酸溶液浸泡过夜;培养后的玻璃器皿用后要立即浸入清水中,注意让水完全进入瓶皿中,不留气泡。
(二)刷洗:浸泡后的玻璃器皿用毛刷沾洗涤剂洗涤(宜选用软毛刷和优质洗涤剂,如高级洗衣粉或洗洁精),绝对不能使用含沙粒的去污粉!洗刷时特别注意洗刷瓶角部位。
(三)浸泡:器皿要充满清洁液,勿留气泡。浸泡时间不应少于6小时,一般应浸泡过夜。清洗液配方如下:
【强液】重铬酸钾63g,浓硫酸1000ml,蒸馏水200L;【次强液】重铬酸钾120g,浓硫酸200ml,蒸馏水1000ml;【弱液】重铬酸钾100g,浓硫酸100ml,蒸馏水100ml。此外,矽酸钠洗液使用比较安全,可代替清洗液,但价格较贵。先配制成100×贮存液:矽酸钾80g,偏磷酸钠9g,加热溶解在1000ml蒸馏水中,使用时用蒸馏水100倍稀释。
(四)冲洗:刷洗和浸酸后都必须用水充分冲洗,不留任何残迹。冲洗宜用洗涤装置,如手工操作,每瓶需用水灌满、倒掉,重复十次以上,最后用蒸馏水漂洗2~3次,晾干备用。
二、胶塞的清洗
新购置的胶塞先用自来水冲洗干净后,再做常规处理。常规洗涤方法:浸泡→2% NaOH煮沸(10~20分钟)→自来水冲洗→1%稀盐酸浸泡(30分钟)→自来水冲洗→蒸馏水清洗(2~3次)→晾干备用。
三、塑料器皿的清洗
目前我国培养使用的塑料器皿多为国外购置的无毒且已消毒的灭菌密封包装商品,一次性使用。必要时,用后经无菌处理可反复使用2~3次,但不宜过多。再用时仍需清洗和灭菌处理。塑料器皿质地软,不宜用毛刷刷洗,使用中应防止划痕,用后立即浸入水中,严防附着物干结。如残留有附着物,可用脱脂棉清拭掉,流水冲洗干净,晾干,再用2% NaOH液浸泡过夜,自来水充分冲洗,然后用5%盐酸溶液浸泡30分钟,最后自来水冲洗和蒸馏水漂洗干净,晾干备用。
消毒
一、紫外线消毒
紫外线直接照射法方便、效果好,是目前各实验室常用的消毒法。适用范围:空气、操作台表面和一些不能使用其他方法进行消毒的培养器皿(如塑料培养皿、培养板等)。要求:(1)培养室的紫外线灯应距地面2.5米,使每平方厘米有0.06微瓦能量的照射,才能发生有效的消毒作用。(2)由于各种细菌对紫外线的敏感性不同,所用照射时间和剂量也不同。缺点:(1)产生臭氧,污染空气,对身体有害;(2)射线照射不到的部位起不到消毒作用,故消毒时物品不宜相互遮挡。注意:不宜边照射边进行实验操作,紫外线对细胞、试剂和培养液都有不良影响,对人体皮肤也有伤害。
二、湿热消毒
湿热消毒即高压蒸汽消毒,是最有效的一种方法。适用范围:布类、胶塞、金属器械、玻璃器皿及某些培养用液。要求:培养用液、橡胶制品:10磅10分钟;布类、玻璃制品、金属器械等:15磅20分钟。
三、滤过消毒
适用范围:大多数培养用液,如人工合成培养液、血清、酶溶液等(这些在高温下会发生变性,失去其功能,必须采用滤过法除菌)。常用滤器:Zeiss滤器、微孔滤膜滤器及各种不同规格的一次性滤器。常用孔径0.22μm滤膜过滤一般用液即可。注意:(1)滤膜用后丢弃,滤器清洗也比较方便,先用毛刷蘸洗涤剂刷洗干净,用自来水冲洗后,再用蒸馏水冲洗,晾干即可;(2)用前再装上一张新的滤膜;(3)消毒时旋钮不要扭太紧,凡与空气接触部位都用纸包装好,以保证消毒效果;(4)消毒后,在无菌环境中立即将旋钮扭紧;(5)滤过少量液体时,可用一种能安装在注射器上的小滤器,使用相同的滤膜,滤过时把滤过物装入注射器针管内,压出过滤物注入无菌容器中即可。