原位杂交组织化学技术是分子生物学与组织化学结合的重要方法，用于在组织或细胞中定位特定核酸序列。本文系统整理了该技术中常用试剂的配制、用途及注意事项，涵盖固定液、培养基、质粒提取液、杂交前处理液、杂交液、漂洗液及信号显示液等。
一、固定液
1. 4%多聚甲醛：适用于组织及细胞固定，也可用于新鲜冰冻切片后固定。常用0.1mol/L PBS（pH7.4）配制，4℃保存。
2. 10%福尔马林：较适于固定细胞。市售甲醛与PBS按比例混合。
3. 10%中性福尔马林：配方：市售甲醛100ml，Na2HPO4 4g，NaH2PO4 6.5g，DEPC水补至1000ml。常用于石蜡切片固定。注意：10%甲醛可促进DNA交联，干扰DNA变性，故不适于DNA杂交；但可通过含50%甲酰胺的杂交液使DNA解链解决。
4. 4%戊二醛：效果较40%差，但0.1%戊二醛常用于固定组织，适于新鲜组织冰冻切片及石蜡切片后固定，常用于DNA原位杂交。
5. 乙醇/醋酸（3:1）：将乙醇与冰醋酸按3:1混合。适于固定细胞的原位杂交，尤其检测DNA时。RNA保留较差，但背景低。
6. 甲醇/醋酸（3:1）：临用前混合。
7. 甲醇/丙酮（1:1）：适于培养细胞的原位杂交。
8. 4%多聚甲醛-0.5%~1%戊二醛：在pH7.4磷酸缓冲液中，用于免疫电镜样品固定。
二、LB培养基
1. 液体LB培养基：称取胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，NaCl 10g，加水约800ml溶解，用5N NaOH调pH至7.0，定容至1000ml，15磅高压灭菌20min。
2. 琼脂糖平板培养基：在液体LB中加入15g琼脂，高压灭菌后倒平板。
三、小量质粒提取主要液体
1. 溶液Ⅰ：50mmol/L葡萄糖，25mmol/L Tris-HCl（pH8.0），10mmol/L EDTA（pH8.0）。
2. 溶液Ⅱ：0.2N NaOH，1% SDS（临用前配制）。
3. 溶液Ⅲ：3mol/L醋酸钠（pH4.8）：称取醋酸钠·3H2O 81.6g，加水溶解，用冰醋酸调pH至4.8，定容至200ml。
四、杂交前处理液
1. 蛋白酶K：储备液（1mg/ml）用0.1mol/L Tris-HCl（pH8.0）、50mmol/L EDTA配制，-20℃保存。工作液（0.025mg/ml）临用前稀释。用于消化组织，提高探针穿透性。过度消化会破坏形态和核酸。
2. 甘氨酸：1mol/L储备液（75g/L），工作液0.1mol/L（1:10稀释）。用于终止蛋白酶K作用。
3. 0.25%醋酸-0.25%醋酸酐：配方：NaCl 5g，三乙醇胺 13.3ml，浓HCl 4ml，DEPC水补至997.5ml，临用前加醋酸酐2.5ml。乙酰化处理可减少探针非特异吸附，降低背景。
4. RNA酶溶液：RNA酶A溶于DEPC水（10mg/ml），-20℃保存。工作液用2×SSC稀释至0.01mg/ml。
5. 0.2% Triton X-100：2ml Triton X-100加入998ml PBS中。
五、杂交用液
1. SSC：20×SSC：NaCl 175.3g，柠檬酸钠 88.2g，加水800ml，用10N NaOH调pH至7.0，定容至1000ml，加DEPC至0.1%，高压灭菌。用于配制预杂交液和洗脱液。
2. Denhardt's液：50×：聚蔗糖（Ficoll）5g，聚乙烯吡咯烷酮（PVP）5g，牛血清白蛋白（BSA）5g，加水定容至500ml，过滤，-20℃保存。
3. 杂交液：含50%去离子甲酰胺，5×SSC，5×Denhardt's，0.5% SDS，100μg/ml鲑精DNA（变性），10%硫酸葡聚糖。硫酸葡聚糖需50℃促溶。探针浓度：RNA 0.5~2μg/ml，DNA 1μg/ml。35S标记探针需加100mmol/L DTT。
六、杂交后漂洗溶液
常用2×SSC/0.1% SDS（高离子强度）和0.1×SSC/0.1% SDS（低离子强度）依次洗脱。RNA探针杂交后需用RNA酶处理（10μg/ml RNase A in 2×SSC）去除未结合探针。Dig标记探针使用缓冲液1（0.1mol/L Tris-HCl, 0.15mol/L NaCl, pH7.5）和缓冲液2（含1% blocking reagent），显色前用缓冲液3（0.1mol/L Tris-HCl, 0.1mol/L NaCl, 50mmol/L MgCl2, pH9.5）平衡。
七、信号显示
1. A-B显影液：用于免疫金银法，A液（0.22mol/L柠檬酸，0.17mol/L柠檬酸钠，0.5mol/L对苯二酚）与B液（0.07mol/L硝酸银）临用前1:1混合，室温避光显影5~15min。
2. DAB-H2O2显色液：用于HRP标记，产物棕黄色。
3. NBT-BCIP显色液：用于碱性磷酸酶标记，产物紫蓝色。
4. Kodak D-19显影液：用于放射自显影，配方：水500ml（50℃），米吐尔2g，无水亚硫酸钠90g，对苯二酚8g，无水碳酸钠52.5g，溴化钾5g，加水至1000ml。
5. Kodak F-5定影液：配方：水600ml（50℃），硫代硫酸钠240g，无水亚硫酸钠15g，28%醋酸48ml，硼酸7.5g，钾矾15g，加水至1000ml。