PCR污染与对策 PCR反应的最大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性，但令人头痛的问题是易污染，极其微量的污染即可造成假阳性的产生. 污染原因 (一)标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘...

PCR反应体系与反应条件 -------------------------------------------------------------------------------- 标准的PCR反应体系： 10×扩增缓冲液 10ul 4种dNTP混合物 各200umol/L 引物 各10～100pmol 模板DNA 0.1～2ug Taq DNA聚合酶 2.5u Mg2+ 1.5mmol/L...

PCR常见问题总汇 PCR产物的电泳检测时间 一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。 假阴性，不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述...

RNA酶活性的控制 为了获得高质量的真核细胞mRNA， 必须使用RNA酶的抑制剂或采用下述的破碎细胞和灭活RNA酶同步进行的方法，最大限度地降低细胞破碎过程中所释放的RNA酶的活性。同时，避免偶然引入实验室内其他潜在的痕量RNA酶也很重要。下面列举避免RNA酶法...

分子生物学实验基础知识 分子生物学是在生物化学基础上发展起来的，以研究核酸和蛋白质结构、功能等生命本质的学科，在核酸、蛋白质分子水平研究发...

原位杂交操作规程 （一）、仪器设备 医用微波炉； 水浴锅。 （二）、试剂 0.2mol/L HCl ： HCl 8.2ml ， H20 定容 0.5L 。 0.1mol/L 三乙醇胺 (pH8.0): 三乙醇胺 5.33ml ， H20 定容 0.4L 。 .5ml/L 醋酸 -2.5ml/L 醋酸酐 : 三乙醇胺 13.2ml ， NaCl 5g ，浓...

荧光原位杂交（FISH）和用引物介导的原位标记（PRINS）操作规程 仪器设备 1 、 医用微波炉； 2 、 水浴锅； 3 、 OLYMPUS BX51 荧光显微镜； 4 、 OLYMPUS DP11 数字显微照相机。 FISH 试剂 （ 1 ） 1×PBS ：由 10×PBS 溶液稀释而成，储存于 4 ℃； （ 2...

原位杂交组织(或细胞)化学 (In situ Hybridization Histochemistry, ISHH) 简称原位杂交(In Situ Hybridization)，属于固相分子杂交的范畴，它是用标记的DNA或RNA为探针，在原位检测组织细胞内特定核酸序列的方法。根据所用探针和靶核酸的不同，原位杂交可分...

核糖核酸干扰技术 转录后基因沉默（PTGS， post- transcriptional gene silencing）-最初被认为仅限于矮牵牛花和其它一些植物中的奇异现象，是目前分子生物学研究中一个最热门的话题。过去几年中，科研工作者已明确转录后基因沉默现象普遍存在于动、植物中，...

SOUTHERN BLOTS 1. RESTRICTION: Use 5mg genomic DNA for Southern hybridization. Aliquot DNA in H20: Total Vol 100l . Add 100l Mix. TOTAL VOL: 200l MIX: Add 100 units per sample of each restriction enzyme. Add appropriate buffer (10X)--20l f...