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  • [细胞生物学] 胚胎干细胞电转染 日期:2005-04-19 10:46:58 点击:1499 好评:0

    ElectroSquarePorator T820 ELECTROPORATION PROTOCOL Mouse Embryonic Stem (ES Cells) Cell Preparation: Growth Medium: DMEM + 10%HS+Non Essential Amino Acids+B-ME+LiF Trypsinization: 0.5ml Trypsin-EDTA per 60mm dish for 5 minutes at 37°C. Sto...

  • [细胞生物学] 质粒提取 日期:2005-04-05 22:20:39 点击:2059 好评:0

    质粒提取 一、导论 已经提出过许多方法用于从细菌中提纯质粒DNA, 这些方法都含有以下3个步骤: 细菌培养物的生长。 细菌的收获和裂解 质粒DNA的纯化。 (一)细菌培养物的生长 从琼脂平板上挑取一个单菌落,接种到培养物中(有含有行当抗生素的液体培养基中...

  • [细胞生物学] 大肠杆菌质粒DNA的提取 日期:2005-04-05 22:19:41 点击:3541 好评:0

    一、大肠杆菌质粒DNA的提取 质粒DNA的提取是从事基因工程工作中的一项基本实验技术,但提取方法有很多种,以下介绍一种最常用的方法: 碱裂解法:此方法适用于小量质粒DNA的提取,提取的质粒DNA可直接用于酶切、PCR扩增、银染序列分析。方法如下: 1、接1%含...

  • [细胞生物学] 石蜡包埋组织的DNA提取及其应用 日期:2005-04-05 22:16:21 点击:2687 好评:0

    石蜡包埋组织的DNA提取及其应用 近10年来,现代分子生物学技术越来越广泛地被用于人类疾病研究的诸领域,为了解病理状态下基因组DNA的变化积累了新资料。目前认为,人类基因组并非人们想像的那样稳定,诸如基因重排、扩增、缺失,突变和DNA甲基化类型改变等...

  • [细胞生物学] 哺乳动物细胞总RNA的分离 日期:2005-04-05 22:15:04 点击:1057 好评:0

    哺乳动物细胞总RNA的分离 哺乳动物细胞总RNA的分离 细胞的裂解 提取步骤 注意事项 这一从培养的单层哺乳动物细胞中分离RNA的实验程序系为Favaloro 等(1980)所介绍程序的改良。该程序同样适用于从悬浮培养的哺乳动物细胞中或从易于分散成单个细胞的哺乳...

  • [细胞生物学] 如何确定RNA质量的经验谈 日期:2005-04-05 22:14:26 点击:1156 好评:0

    如何确定RNA质量的经验谈! 1)检测RNA溶液的吸光度 280、320、230、260nm下的吸光度分别代表了核酸、背景(溶液浑浊度)、盐浓度和蛋白等有机物的值。一般的,我们只看OD260/OD280(Ratio,R)。1.82.0时,我们认为RNA中蛋白或者时其他有机物的污染是可以容...

  • [细胞生物学] 染色体结构显示和检测 日期:2005-04-05 21:55:00 点击:1068 好评:0

    染色体结构显示和检测 1) 染色体显带 显Q带法 1. 漂洗:取经过干热预处理或已老化的染色体标本,置于pH6.0缓冲液中浸5~10分钟。 2. 染色:浸入pH6.0的GM或QD染液中5~10分钟。 3. 漂洗:浸入新鲜pH6.0缓冲液中漂洗两次,每次5分钟。 4. 观察:向标本染色体面...

  • [细胞生物学] 培养细胞染色体显示法 日期:2005-04-05 21:53:02 点击:979 好评:0

    培养细胞染色体显示法 1) 传代培养细胞染色体显示法 1.培养细胞:取处于指数生长期、用较大瓶皿培养的、80%~90%汇合单层培养细胞。 2.加秋水仙素:使用最终浓度为0.02~0.8微克/毫升营养液,温箱继续培养6~10小时;或用低温封闭法:把培养细胞置于4℃...

  • [细胞生物学] 几种常用转化细胞和转化技术 日期:2005-04-05 21:47:04 点击:888 好评:0

    几种常用转化细胞和转化技术 1)致癌化学物转化细胞:转化叙利亚地鼠胚胎细胞实验 1.取材:妊娠后第13天取材,取数个同窝胚胎,去头和内脏,在无菌条件下剪碎至米粒大小,再用0.25%胰蛋白酶(含0.01%EDTA)37℃消化30分钟,滤过、低速离心、吸除消化液、...

  • [细胞生物学] 特殊培养法 日期:2005-04-05 18:11:06 点击:993 好评:0

    特殊培养法 1)二倍体细胞培养法 二倍体细胞培养法与一般培养相同,关键在于传代,其传代程序为: 1. 吸除旧培养液注入另瓶中。 2. 用温BSS冲洗1次。 3. 用0.25%温胰蛋白酶消化,加入消化液量以仅覆盖细胞层即可;作用1~5分钟。 4. 待细胞附着松动、细胞质边...

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