CRISPR技术大大加速了菌株工程领域。然而，在酿酒酵母中所做的鲁棒的多重基因组编辑工具努力还是不够的。本研究利用来自铜绿假单胞菌的RNA内切酶Csy4（Csy4是CRISPR家族的一个Cas9的同源蛋白，有时也被称为Cas6f，具有核酸内切酶的功能）的RNA加工能力，从单一转录产生多种gRNA用于酿酒酵母中的基因编辑和基因干扰。在基因组编辑方面，实验进行了FAA1,，FAA4，POX1和TES1的四重删除，其中有24个克隆的效率达到了96%。随后，利用这一系统有效的调节OLE1，HMG1和ACS1这3个基因的转录。因此，本实验证明利用来自铜绿假单胞菌的Csy4能够有效地实现符合基因编辑和基因调控。