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杜氏肌营养不良症（Duchenne muscular dystrophy，DMD）是一种X连锁隐性遗传病，由编码抗肌萎缩蛋白的基因突变引起。患者通常在3-5岁发病，表现为进行性肌无力，尤其是下肢，导致爬楼梯困难。12岁时常失去行走能力，需依赖轮椅，最终在20-30岁因呼吸或心力衰竭死亡。目前尚无治愈方法，基因治疗是潜在策略，但免疫反应是主要障碍。

斯坦福大学神经学与神经科学教授Lawrence Steinman博士指出：“基因疗法正成为单基因疾病的主流治疗手段，但问题在于，向基因缺陷患者引入正常蛋白基因时，免疫系统可能将正常蛋白视为外源物并产生攻击，甚至致命。我们认为已找到解决方案。”

研究结果于9月3日以“Engineered DNA plasmid reduces immunity to dystrophin while improving muscle force in a model of gene therapy of Duchenne dystrophy”为题发表在《Proceedings of the National Academy of Sciences》上。Steinman为资深作者，主要作者为资深科学家Peggy Ho博士。

病毒载体与微抗肌萎缩蛋白

DMD是单基因病，适合基因治疗。常用腺相关病毒（AAV）作为载体，但抗肌萎缩蛋白基因过大，无法装入AAV。因此，研究共同作者、华盛顿大学Jeffrey Chamberlain博士设计了截短的微抗肌萎缩蛋白基因，可产生功能蛋白，并适合AAV包装。

诱导免疫耐受的质粒策略

为克服免疫反应，Steinman团队将微抗肌萎缩蛋白基因插入一种特殊质粒。质粒是环状DNA，细菌常用其交换耐药基因。通常，质粒含有免疫刺激基序，但Steinman等人先前已改造质粒，用抑制免疫的DNA序列替代刺激基序，形成耐受诱导质粒。该质粒已在两种自身免疫病临床试验中显示效果。

本研究中，研究人员采用“组合拳”：先给小鼠注射携带微抗肌萎缩蛋白的AAV，一周后，再注射耐受诱导质粒（含或不含微抗肌萎缩蛋白基因）。实验分三组：假溶液组、假溶液加无基因质粒组、以及含微抗肌萎缩蛋白基因的质粒组。15只6周龄DMD模型小鼠接受治疗，持续32周。

结果：肌肉力量改善，免疫反应减弱

32周后，接受含微抗肌萎缩蛋白质粒的小鼠肌肉力量显著增强，肌营养不良纤维减少。其血液中炎性细胞因子水平降低，针对微抗肌萎缩蛋白的抗体反应减弱。Steinman表示：“虽然仍处早期，但结果表明，将目标蛋白基因插入耐受诱导质粒，可诱导对多种免疫原性蛋白的耐受。我们已在1型糖尿病（胰岛素前体）和多发性硬化（髓磷脂）中观察到类似效果，现在概念验证扩展至基因治疗。”