18．1mol/L MgCl₂溶液

　　【配制方法】

　　在800ml水中溶解203.4g MgCl₂·6H₂O，用水定容至1L，分装成小份并高压灭菌备用。

　　【注意】

　　MgCl₂极易潮解，应选购小瓶（如100g）试剂，启用新瓶后勿长期存放。

　　19．β-巯基乙醇（BME）溶液

　　【配制方法】

　　一般得到的是14.4mol/L溶液，应装在棕色瓶中保存于4℃。

　　【注意】

　　BME或含有BME的溶液不能高压处理。

　　20．NBT溶液

　　【配制方法】

　　把0.5g氯化氮蓝四唑溶解于10ml 70%的二甲基甲酰胺中，保存于4℃。

　　21．酚/氯仿溶液

　　【配制方法】

　　把酚和氯仿等体积混合后用0.1mol/L Tris·HCl(pH7.6)抽提几次以平衡这一混合物，置棕色玻璃瓶中，上面覆盖等体积的0.01mol/l Tris·HCl(pH7.6)液层，保存于4℃。

　　【注意】

　　酚腐蚀性很强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜，穿防护服。所有操作均应在化学通风橱中进行。与酚接触过的部位皮肤应用大量的水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。

　　22．10mmol/L苯甲基磺酰氟（PMSF）溶液

　　【配制方法】

　　用异丙醇溶解PMSF成1.74mg/ml（10mmol/L），分装成小份贮存于-20℃。如有必要可配成浓度高达17.4mg/ml的贮存液（100mmol/L）。

　　【注意】

　　PMSF严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF，应立即用大量水冲洗之。凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。

　　PMSF在水溶液中不稳定。应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。PMSF在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快，且25℃的失活速率高于4℃。pH值为8.0时，20μmmol/l PMSF水溶液的半寿期大约为85min，这表明将PMSF溶液调节　为碱性（pH>8.6）并在室温放置数小时后，可安全地予以丢弃。

　　23．磷酸盐缓冲溶液（PBS）溶液

　　【配制方法】

　　在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na₂HPO₄和0.24g KH₂PO₄,用HCl调节　溶液的pH值至7.4加水定容至1L，在15lbf/in²(1034×10⁵Pa)高压下蒸气灭菌20min。保存于室温。

　　24．1mol/L乙酸钾（pH7.5）溶液

　　【配制方法】

　　将9.82g乙酸钾溶解于90ml纯水中，用2mol/L乙酸调节　pH值至7.5后加入纯水定容到1L，保存于-20℃。

　　25．乙酸钾溶液（用于碱裂解）

　　【配制方法】

　　在60ml 5mol/L乙酸钾溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml水，即成钾浓度为3mol/L而乙酸根浓度为5mol/L的溶液。

　　26．3mol/L乙酸钠（pH5.2和pH7.0）溶液

　　【配制方法】

　　在80ml水中溶解408.1g三水乙酸钠，用冰乙酸调节　pH值至5.2或用稀乙酸调节　pH值至7.0，加水定容到1L，分装后高压灭菌。

　　27．5mol/L NaCl溶液

　　【配制方法】

　　在800ml水中溶解292.2g NaCl加水定容至1L，分装后高压灭菌。

　　28．10%十二烷基硫酸钠（SDS）溶液

　　【配制方法】

　　在900ml水中溶解100g电泳级SDS，加热至68℃助溶，加入几滴浓盐酸调节　溶液的pH值至7.2，加水定容至1L，分装备用。

　　【注意】

　　SDS的微细晶粒易扩散，因此称量时要戴面罩，称量完毕后要清除残留在称量工作区和天平上的SDS，10%SDS溶液无须灭菌。

　　29．20×SSC溶液

　　【配制方法】

　　在800ml水中溶解175.3g NaCl和88.2g柠檬酸钠，加入数滴10mol/l NaOH溶液调节　pH值至7.0，加水定容至1L，分装后高压灭菌。

　　30．20×SSPE溶液

　　【配制方法】

　　在800ml水中溶解17.5g NaCl、27.6g NaH₂PO₄·H₂O和7.4g EDTA，用NaOH溶液调节　pH值至7.4（约需6.5ml 10ml/L NaOH），加水定容至1L，分装后高压灭菌。

　　31．100%三氯乙酸溶液

　　【配制方法】

　　在装有500g TCA的瓶中加入227ml水，形成的溶液含有100%（M/V）TCA。

　　32．1mol/L Tris溶液

　　【配制方法】

　　在800ml水中溶解121.91g Tris碱，加入浓HCl调节　pH值至所需值。

　　pH　　　HCl

　　7.4　　 70ml

　　7.6 　　60ml

　　8.0　　 42ml

　　应使溶液冷至室温后方可最后调定pH值，加水定容至1L，分装后高压灭菌。

　　【注意】

　　如1mol/L溶液呈现黄色，应予丢弃并置备质量更好的Tris。

　　尽管多种类型的电极均不能准确测量Tris溶液的pH值，但仍可向大多数厂商购得合适的电极。

　　Tris溶液的pH值因温度而异，温度每升高1℃，pH值大约降低0.03个单位。例如：0.05mol/L的溶液在5℃、25℃、和37℃时的pH值分别为9.5、8.9和8.6。

　　33．Tris缓冲盐溶液（TBS）（25mmol/l Tris）

　　【配制方法】

　　在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl、0.2g KCl和3g Tris碱，加入0.015g酚并用HCl调至pH值至7.4，用蒸馏水定容至1L，分装后在151bf/in2(1.034×10⁵Pa)高压下蒸汽灭菌20min，于室温保存。

　　34．X-gal溶液

　　【配制方法】

　　X-gal为5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D半乳糖苷。用二基甲酰胺溶解X-gal配制成的20mg/ml的贮存液。保存于一玻璃管或聚丙烯管中，装有X-gal溶液的试管须用铝箔封裹以防因受光照而被破坏，并应贮存于-20℃。X-gal溶液无须过滤除菌。

　　杂交试验中用于降低背景的封闭剂

试剂

用途 Denhardt试剂 Northern杂交 使用RNA探针的杂交 单拷贝序列的Southern杂交 将DNA固定于尼龙膜上的杂交 Denhardt试剂通常配制50×贮存液，过滤后保存于-20℃。可将该贮存液10倍稀释于预杂交液（常为含有0.5%SDS和100μg/ml经变性被打断的鲑精DNA的6×SSC或6×SSPE）中。50×Denhardt液中含5g聚蔗糖（Ficoll,400型，Pharmacia）、5g聚乙烯吡咯烷酮和5g牛血清白蛋白（组分V”Sigmal），加水至终体积为500ml。 BLOTTO Grunstein-Hogness杂交 Benton-Davis杂交 除单拷贝序列Southern杂交以外的所有Southern杂交 斑点印迹 1×BLOTT（牛乳转移技术优化液，Bovine Lacto Transfer Technique Optimizer）,是含5%胶脂奶粉和0.02%叠氮钠的水溶液，应保存于4℃。使用前可用预杂交液稀释25倍。BLOTTO不应与高浓度的SDS并用，因为后者会导致牛奶中蛋白质析出。如果杂交背景不合要求，可在杂交液中加入NP-40至终浓度为1%。BLOTTO不能用作Northern杂交的封闭剂，因为这一封闭剂中可能含有RNA酶，其活性之高使人无法接受。 注意：叠氮钠有毒性，取用时需戴手套小心操作。含叠氮钠的溶液应予明确标记。 肝素 Southern杂交 原位杂交 肝素（Sigma H-7005，从猪中提取的二级产品或相当等级的产品）用4×SSPE或4×SSC溶解配制成50mg/ml的浓度，保存于4℃。肝素在含有葡聚糖硫酸酯的杂交液中用作封闭剂的浓度为500μg/ml，在不含葡聚糖硫酸酯的杂交液中的浓度为50μg/ml。 经变性并被打断的鲑精DNA southern和Northern杂交 把鲑鱼精子DNA（Sigma,Ⅲ,盐钠）溶解于水配制成10mg/ml的浓度，必要时于室温磁力搅拌2～4h助溶。把溶液中NaCl的浓度调至0.1mol/L，并用酚和酚/氯仿各抽提一次，回收水相。合DNA溶液快速通17号皮下注射针头12次，以剪切DNA。加入2倍体积用冰预冷的乙醇沉淀DNA。离心回收DNA并重溶于水，配制成10mg/ml的浓度，测定溶液的OD₂₆₀值并计算出精确的DNA浓度，然后煮沸10min，分装成小份保存于-20℃。使用前置沸水浴中加热5min，然后迅速在冰浴中骤冷。预杂交液中应含有100μg/ml经变性并被打断的鲑鱼精子DNA

　　六、常用凝胶的技术参数

　　1．葡聚糖凝胶的某些技术数据

粗级 100～300

　　(≈5～100目) 　 　 　 　 　 　 　

中级 50～150

　　(≈100～200目) 1,000～


5,000 100～


5,000

4～6

1.5±0.2
6
2

细级 20～800(≈200～400目) 　 　 　 　 　 　 　

超细 10～40 　 　 　 　 　 　 　 Sephadex G-50 　 　 　 　 　 　 　 　

粗级 100～200 　 　 　 　 　 　 　

中级 50～150 1,500～ 500～ 　 　 　 　 　

细级 20～80 30,000 10,000 9～11 5.0±0.3 6 2

超细 10～40 　 　 　 　 　 　 　 Sephadex G-75 　 　 　 　 　 　 　 　 　 40～120 3,000～ 1,000～ 　 　 　 　 　

超细 10～40 70,000 950,000 12～15 7.5±0.5

24

3

3.92～15.86 Sephadex G-100 　 　 　 　 　 　 　 　 　 40～120 4,000～ 1,000～ 　 　 　 　 　

超细 10～40 1,500,000 150,000 15～20 10.0±1.0 48 5 2.35～9.41 Sephadex G-150 　 　 　 　 　 　 　 　 　 40～120 5,000～ 1,000～ 20～30 　 　 　 　

超细 10～40 400,000 150,000 18～22 15.0±1.5 72 5 0.88～3.53 Sephadex G-200 　 　 　 　 　 　 　 　 　 40～120 5000～ 1000～ 30～40 　 　 　 　 　 10～40 800,000 200,000 20～25 20.0±2.0 72 5 0.39～1.57

2.聚丙烯酰胺凝胶的技术数据

型号

排阻的下限

(分子量)

分级分离范围

(分子量)

膨胀后的床体积(ml/g干凝胶)

膨胀所需最少时间(室温,h) Bio-gel-P-2 1,600 200～2,000

3.8

2～4 Bio-gel-P-4 3,600 500～4,000

5.8

2～4 Bio-gel-P-6 4,600 1,000～5,000

8.8

2～4 Bio-gel-P-10 10,000 5,000～17,000

12.4

2～4 Bio-gel-P-30 30,000 20,000～50,000

14.9

10～12 Bio-gel-P-60 60,000 30,000～70,000

19.0

10～12 Bio-gel-P-100 100,000 40,000～100,000

19.0

24 Bio-gel-P-150 150,000 50,000~150,000

24.0

24 Bio-gel-P-200 200,000 80,000～200,000

34.0

48 Bio-gel-P-300 300,000 100～400,000

40.0

48

3．琼脂糖凝胶的技术数据

型号

琼脂糖含量

%（W/W）

排阻的下限

（分子量）

分级分离的范围（分子量）

生产厂家 Sepharose 4B 4 　 0.3×10⁶～3×10⁶ Pharmacia Sepharose 2B 2 　 2×10⁶～25×10⁶ Sagavac 10 10 2.5×10⁵ 1×10⁴～2.5×10⁵

Seravac Sagavac 8 8 7×10⁵ 2.5×10⁴～7×10⁵ Sagavac 6 6 2×10⁶ 5×10⁴～2×10⁶ Sagavac 4 4 15×10⁶ 2×10⁵～15×10⁶ Sagavac 2 2 150×10⁶ 5×10⁵～15×10⁷ Bio-gel A-0.5M 10 0.5×10⁶ <1×10⁴～0.5×10⁶


Bio-Rad Bio-gel A-1.5M 8 1.5×10⁶ <1×10⁴～1.5×10⁶ Bio-gel A-5M 6 5×10⁶ 1×10⁴～5×10⁶ Bio-gel A-15M 4 15×10⁶ 4×10⁴～15×10⁶ Bio-gel A-50M 2 50×10⁶ 1×10⁵～50×10⁶ Bio-gel A-150M 1 150×10⁶ 1×10⁶～150×10⁶

　　4．各处凝胶所允许的最大操作压

凝胶

最大静水压（kPa）

Sephadex 　

G-10

9.8

G-15

9.8

G-25

9.8

G-50

9.8

G-75

4.9

5．琼脂糖凝胶浓度与线性DNA分辨范围

凝胶浓度（%）

线性DNA长度（bp）

0.5

1000～30000

0.7

800～12000

1.0

500～10000

1.2

400～7000

1.5

200～3000

2.0

50～2000

　　6．染料在变性聚丙烯酰胺凝胶中的迁移速度

凝胶浓度（%）

溴酚蓝

二甲苯青FF

5．0

35bp

140bp

6．0

26bp

106bp

8．0

19bp

75bp

10．0

12bp

55bp

20．0

8bp

28bp

7．染料在非变性聚丙烯酰胺凝胶中的迁移速度

凝胶浓度（%）

溴酚蓝

二甲苯青FF

3.5

100bp

460bp

5.0

65bp

260bp

8.0

45bp

160bp

12.0

20bp

70bp

15.0

15bp

50bp

20.0

12bp

45bp

　　七、氨基酸的特性

质量 侧链电离的pHa值

结构式

丙氨酸（alanine） Ala A 89.09 　 精氨酸（arginine） Arg R 174.2 12.48 　 (责任编辑：泉水)