(1)20%蔗糖液: 试剂:蔗糖 20g 0.1mol/L PB(pH7.5) 至100ml 配制方法:先以少许0.1mol/L的PB溶解蔗糖,再加0.1mol/l PB至100ml充分混合,置4℃冰箱保存。 该液多用于纯光镜研究。标本在刚放入浓度如此高的蔗糖液,常浮在上面,当标本沉到底部时即可。通常光镜标本浸泡在20%蔗糖液中过夜。都能达到要求。 (2)20%蔗糖-5%甘油: 试剂:蔗糖 20g 甘油 5ml 0.1mol/L PB 至100ml(约95ml) 配制方法:先用少许PB溶解蔗糖后,再加入甘油,充分混匀,最后补足PB至100ml,于4℃保存备用。 该液主要用于电镜标本的处理,常浸泡过夜(其它浓度的蔗糖中常分别为2h左右)。 蔗糖是一种廉价的防冻剂,兼有脱水的作用,它可减小标本在冰冻切片时冰晶形成的数量和大小,应用较为方便。若无试剂蔗糖(Sucrose)也可用普通蔗糖(Cane Sugar)。配制好的蔗糖溶液,放置时间超过一个月时,应重新配制。 2.T riton X-100(聚乙二醇辛基苯基醚) 免疫细胞化学中,Triton X-100常用浓度为1%和0.3%,但通常是先配制成30%的Triton X-100储备液,临用时稀释至所需浓度。 30% Triton X-100的配制: 试剂:Triton X-100 28.2ml 0.1mol/L PBS(pH7.3)或0.05mol/l TBS(pH7.4) 72.8ml 配制方法:取Triton X-100及PBS(或TBS)混合,置37℃~40℃水浴中2~3h,使其充分溶解混匀。用前取该储备液稀释至所需浓度。 Triton X-100是一种非离子型表面活性剂(或称清洁剂),分子量为646.86(C34H62O11)。它能溶解脂质,以增加抗体对细胞膜的通透性。1%的Triton X-100常用于漂洗组织标本,0.3%的Triton X-100则常用于稀释血清,配制BSA等。 3.甲醇-H2O2液 试剂:纯甲醇 10ml 30% H2O2 0.1ml 配制方法:吸取30%的H2O20.1ml,加入100ml纯甲醇中,充分混匀即可,使H2O2终浓度为0.3%(也有的用0.03%、0.5%等)。 甲醇-H2O2处理组织标本,具有封闭内源性过氧化物酶活性的作用,但其具体机制至今仍不详。通常处理时间在室温约为5~30min。注意,用H2O2处理标本,对某些抗原的抗原性有影响,故建议在使用新的抗血清或抗原时,最好同时设立非处理对照组。 4.常用生理盐液 常用生理盐液的成分(g/1000ml) Kerbs Kerbs-Hen-selsit Locke Tyrode Ringer NaCl5.54 6.92 9.00 8.00 6.50 KCl 0.36 0.35 0.42 0.20 0.14 MgCl2 - - - 0.10 - MgSO4·7H2O 0.29 0.29 - - - CaCl2 0.28 0.28 0.24 0.20 0.12 NaH2PO4 - - - 0.05 0.01 KH2PO4 0.16 0.16 - - - NaHCO3 2.10 2.10 0.15 1.00 0.20 Glucose 2.10 - 1.00 1.00 2.00 Pyruvic acid 0.43 - - - - Fumaric acid 0.62 - - - - Glutamic acid 0.72 - - - - 配制方法:精确称取各种药品(如上表),加入500ml重蒸水中,待完全溶解后,补足重蒸水至1000ml,充分混匀即可。 在免疫细胞化学实验中,某些物质不宜经固定剂作用或经固定剂作用后仍易丢失,而需浸泡在生理盐液中。这些生理盐液的成分与正常哺乳动物血清的成分相似,能使组织离体后能处于尽量接近生理状态时的环境。Glucose通常是在用前临时加入。有的(如Kerbs液)在使用时通常需通入含CO2/O2为2.5~5%/97.5~95%的气体。这些生理盐液中的CO2和二碳酸盐,主要起缓冲作用,Glucose主要是提供离体组织有限的代谢所需的能量。 (吴康 周德山) (责任编辑:泉水) |