染色体改构复合物（BAF）与转录因子（NF1/CTF）和RNA聚合酶II在基因转录活动中的联系

the Co-relations of Chromosome Remodeling Complexes(BAF) with Transcriptional Factor (NF1/CTF) and RNA Polymerase II  in Gene Transcriptional Activity

哺乳动物SWI/SNF（BAF）复合物和转录因子（NF1/CTF）都是转录活动的重要调控因子，许多实验证实，它们共同参与了基因转录调控活动。BAF复合物与转录因子NF1/CTF是否一同参加了由RNA聚合酶II介导的基因转录起始复合物的形成，目前还没有比较一致的认识，已有的模型仍缺乏实验支持。本文以Jurkat细胞、HeLa细胞和小鼠脾T淋巴细胞为研究材料，通过酶联免疫吸附实验（ELISA）、免疫共沉淀、免疫荧光共定位和免疫电镜双标记等实验，观察和分析了BAF复合物与转录因子NF1/CTF和RNA聚合酶II在基因转录活动中的相互联系。主要结果如下：

1、通过免疫印记实验证实，在自主增殖的Jurkat细胞核中， 存在BAF复合物和转录因子NF1/CTF。进一步用小鼠T淋巴细胞活化体系的研究发现，未经ConA激活的T淋巴细胞中，BAF复合物和转录因子NF1/CTF不表达或低水平表达。经ConA激活后，小鼠脾T淋巴细胞中BAF复合物和转录因子NF1/CTF开始表达，随着刺激时间的增加，表达量增加。以上实验表明，BAF复合物和转录因子NF1/CTF在细胞中的表达是与细胞活化和基因转录活动密切相关的。

2、免疫共沉淀实验证明，在活化的小鼠脾T淋巴细胞和自主增殖的Jurkat细胞中，BRG1、NF1/CTF和RNA聚合酶II是紧密结合在一起的，在没有活化的小鼠脾T淋巴细胞中这三种蛋白质没有免疫共沉淀现象。以HeLa细胞为材料，分别用抗BRG1抗体、抗RNA聚合酶II抗体和抗NF1/CTF抗体进行免疫荧光共定位分析，发现BAF复合物的核心亚基BRG1和RNA聚合酶II的大亚基存在很好的荧光共定位现象， NF1/CTF和RNA聚合酶II的大亚基之间的共定位现象不明显，BRG1和NF1/CTF也有很好的共定位现象。为了进一步揭示BAF复合物与转录因子NF1/CTF和RNA聚合酶II的大亚基之间在亚显微结构水平的联系，我们用HeLa细胞进行了免疫电镜双标记实验。通过计算和分析分别代表两种蛋白质的两种金颗粒之间的距离，进一步证实BAF复合物与RNA聚合酶II的大亚基及转录因子NF1/CTF之间的联系紧密，而转录因子NF1/CTF与RNA聚合酶II的大亚基之间的联系相对较弱。

3、通过免疫荧光实验我们还发现，BRG1和RNA聚合酶II小亚基B6之间没有明显共定位现象，与RNA聚合酶II小亚基B8有部分的共定位现象；NF1/CTF与RNA聚合酶II小亚基B6有比较明显的共定位，与RNA聚合酶II小亚基B8有部分的共定位。这些结果表明，BRG1和RNA聚合酶小亚基B6可能不直接联系，与小亚基B8可能部分联系。NF1/CTF可能是通过与BRG1和RNA聚合酶II小亚基B6的联系参与了转录起始复合物的形成。免疫电镜双标记实验结果进一步证实了上述观察结果，即BRG1与RNA聚合酶II小亚基联系不紧密或不直接联系。转录因子NF1/CTF与RNA聚合酶II小亚基B6的联系比较紧密。

4、研究表明，肌动蛋白是BAF复合物的一个亚基，我们在本论文中通过蛋白质免疫沉淀、免疫荧光共定位和免疫电镜双标记实验，探讨了肌动蛋白与BRG1、转录因子NF1/CTF和RNA聚合酶II之间的联系。结果表明，在活化的小鼠脾T淋巴细胞和自主增殖的Jurkat细胞中，肌动蛋白可以与BAF复合物、转录因子NF1/CTF和RNA聚合酶II结合。肌动蛋白与BAF复合物和RNA聚合酶II的联系紧密，与转录因子NF1/CTF的联系不太密切。

根据上述实验结果，我们推测，在转录活跃的细胞中，BAF复合物、转录因子NF1/CTF、RNA聚合酶II和肌动蛋白是结合在一起的，共同参加了基因转录起始复合物的形成活动；BAF复合物与RNA聚合酶II的大亚基直接联系，与转录因子NF1/CTF通过其N末端直接联系，转录因子NF1/CTF与RNA聚合酶II小亚基B6直接联系。