人体液中实体瘤相关蛋白研究的新方法

　　在肿瘤的发生、发展和转移的整个过程中，局部宿主组织的微环境起到了非常重要的作用。肿瘤的生长通常需要广泛的组织协调，来提供肿瘤细胞生长、血管生成、侵袭和转移所需要的合适环境。由于血清会不断地进入组织，所以研究人员希望能通过血浆中蛋白代谢的变化来反映肿瘤的病理学改变。然而，由于其中含有大量的白蛋白和其他蛋白，血浆又是含蛋白样品中最难定性的，使得这项工作变得复杂和艰难。中国医学科学院/中国协和医科大学肿瘤研究所高燕宁研究员代该所程书钧院士汇报了他们建立的人体液中实体瘤相关蛋白研究的新方法。该方法不仅为寻找肿瘤治疗的生物标识或靶点提供了很有价值的证据，也有利于更好地理解肿瘤发展和演变的分子机制。

　　在研究中，他们对被肺肿瘤细胞和其周围的正常支气管细胞释放到无血清条件培养液中的蛋白进行了分析，蛋白组成是通过一维的聚丙烯酰胺凝胶电泳和液质联用色谱两种方法共同分析得到的。为了确认以上体外试验证实的蛋白质，他们用酶联免疫吸附试验和免疫组化分析对肺癌患者和对照组的血液、支气管肺泡灌洗液和肿瘤细胞中的蛋白水平进行了检测。高燕宁表示，到目前为止，大约有400种蛋白已经被证实存在于研究人员收集的肺癌和支气管样品的无血清条件培养液中，其中许多是在人体液检测中没有被报道过的。

　　高燕宁等研究人员还通过酶联免疫标记法比较了血浆和支气管肺泡灌洗液中TIMP1（金属蛋白酶1组织抑制剂）、MMP1（基质金属蛋白酶1）、fasin、14-3-3sigma和其他11种蛋白的水平，发现在肺癌患者和正常对照组之间，一些被测蛋白的血浆水平有着显著性差异。而且研究结果表明，体外试验证实的蛋白质在人体液中也能被找到。为了发现这些已知蛋白在肿瘤进展过程中的作用，他们又选择了14-3-3sigma做进一步的研究。免疫组化分析显示，其在支气管上皮细胞的阳性染色率为77.78%，比在肺癌细胞（48.72%）中高很多。PG细胞（一种巨细胞肺癌细胞株），能够分别稳定转染所构建的表达14-3-3sigmacDNA的质粒或空白载体质粒。而且数据表明，14-3-3sigma的过度表达能够阻止体外的细胞增殖和群体的形成，也能逆转肺癌细胞的转型。高燕宁总结说，从他们所做的研究可以认为，该方法应该也能被应用于其他人实体瘤中，比如肝癌、前列腺癌、胰腺癌。 (责任编辑：泉水)

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