近日,第四军医大学基础部微生物教研室韦三华博士等,在一项国家自然科学基金资助的课题研究中,成功建立一株丙型肝炎病毒(HCV)复合多表位基因P815细胞系。这一基因细胞系的克隆建立,为我国HCV疫苗的研究奠定了基础。
据介绍,在HCV感染过程中,极易产生变异株,给预防HCV感染的疫苗研制带来困难,使这一研究长期以来进展缓慢。有研究表明,HCV核心区在各种基因型HCV中最为保守,其诱导的细胞免疫应答对HCV感染的恢复起重要作用,对研制HCV疫苗有重要价值。因此,建立HCV疫苗的靶细胞,为HCV疫苗提供优质的研究平台,已成为科研人员关注的研究新思路。 韦三华博士等采用基因重组技术,把含HCV载短C基因、HVR1模拟表位基因与CTL基因串联,组成HCV复合多表位基因,构建穿梭质粒,筛选重组株,建成抗HCV的BCG新型疫苗。在此基础上,他们又将复合多表位基因亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1(-),通过脂质体转染P815细胞,经载体连接、转化、细胞培养及筛选,成功地克隆出多表位基因P815细胞系,为BCG疫苗实验提供了靶细胞。经检测,重组质粒pcDNA3.1(-)-CtEm在酶切阳性克隆鉴定下,其经测序列与设计序列完全一致,表明目的基因成功克隆入真核表达载体;转染细胞mRNA扩增后得到的450bp片段,与预期片段大小相符。同时还发现,克隆转染的P815的细胞系,可在多表位基因原核系统进行表达,其抗原性更强,更广谱,对HCV感染患者血清的反应率可达53%~80%。提示HCV复合多表位基因的真核表达载体及重组质粒转染P815细胞系构建成功。 本研究采用基因重组技术,在国内首次建成BCG新型疫苗的基础上,又成功地克隆出表达多表位基因的抗原特异性P815细胞系,它不仅成为稳定高效的靶细胞,而且为新型BCG活载体疫苗带来了良好的应用前景。 (责任编辑:泉水) |