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第三节 复制的基本模式 1. θ型 2. 滚环式 3. D 型 第四节 复制过程 一、复制的起始 复制起始示意图
二、延伸过程 M13、G4 phage
φx174
三、回环模型 在oriC 和oriλ上起始涉及相同的反应 阶段 oriC oriλ Ori 的识别和解链 DnaA O 解旋酶的结合和解链DnaB DnaB DnaC P RNA Pol RNA Pol 释放复合体 DnaJ? DnaJ? 四、线形末端的复制 解决方法: 1. 成环 2. 末端冗余 3. 腺病毒
五、真核DNA 复制 1.DNA 聚合酶
DNA 聚合酶α δ ε β γ 位置核核核核线粒体 功能引发延伸修复,合成修复复制 酶活性Pol I 3‘-5’外切核酸酶3‘-5’外切核酸酶3‘-5’外切核酸酶 2.SV40DNA 复制 (1)RNA 引发,起始DNA 合成 (2)DNAδ延伸 功能 E.coli SV40 起始蛋白 DNA A T 螺旋酶 DNA B T 引发 DNA G Polα 聚合 Pol IIIα Polδ 外切酶活性 Pol IIIε Pol I δ 滑动钳 Pol IIIβ PCNA 单链结合蛋白 SSB RPA 3.端粒酶 端粒 TTGGGG 富含TG 结构, 不同生物重复次数不同 端粒酶性质 真核生物复制过程中的核小 体结构 亲本八聚体 全保留装配 图示详见武汉大学出版社 《分子生物学》第91 页。 图7-23 新产生的组蛋白 八聚体装配的三种模式 图7-24 亲代组蛋白八聚 体和新合成的组蛋白八聚体 与DNA 结合的可能方式,Ⅱ 是正确的。
第五章转录 第一节 原核生物的转录 一、转录的一般概念 1.转录是不对称的 模板链/非模板链;有义链/无义链; 正链/负链;编码链。 病毒的分类: (1)RNA 病毒:RNA→mRNA(+链病毒); RNA→互补RNA→翻译(-链病毒)。 (2)DNA 病毒 2.DDRP 3.5’;3’ 4.pppA;pppG 5.RNApol 忠实性 6.转录泡 二、RNA 聚合酶 holoenzyme:σ起始因子,核心酶 真核生物三种RNA 聚合酶的特点 RNA Pol 位置产物相对活性对α-鹅膏蕈的敏感性 Pol Ⅰ 核仁 28S,18S,5.8S rRNAs 50%~70% 不敏感 Pol Ⅱ 核质 hnRNA,mRNA,某些snRNAs 20%~40% 高度敏感 Pol Ⅲ 核质 tRNA,5S rRNA,某些snRNAs ~10% 片段特异,中度敏感 转录的抑制剂 抑制剂靶酶抑制作用 利福霉素细菌全酶和β亚基结合,抑制起始 链霉溶菌素细菌核心酶和β亚基结合,抑制起始 放射线素D 真核 PolⅠ 和DNA 结合,阻止延伸 α-鹅膏蕈真核 PolⅡ 和 RNA PolⅡ 结合 三、转录过程 原核生物基因的转录: 启动子高度保守 足迹法突变法硫酸二甲酯法 (足迹法图见下页起始过程左边图) CAP 位点正调节位点 G 敏感性操纵子 25
起始过程 1. 模板结合,扫描式SCAN 2. 起始识别 3. 活化 4. 进入起始位点 26
延伸 终止 P 因子依赖型终止子 P 因子非依赖型终止子 通读效应 第二节 RNA反转录 64 年:抑制DNA 复制的放 线菌素能抑制RNA 病毒。 逆转录酶RDDP RDDP RNA 病毒编码 活性: cDNA 制备 乙肝病毒 ☆由逆转录病毒基因组中pol 基因 编码。是一种多功能酶。 ☆有以RNA 为模板和以DNA 为模板合 成DNA 的DNA 聚合酶活性。 ☆需要RNA 或DNA 做引物; ☆有核糖核酸酶 H 的活性(在逆转 录酶的C 端),能从3’→5’和从5’ →3’水解RNA,使RNA 与DNA 的杂 交体分离。
逆向转录酶的生物学意义: 1.用于合成cDNA。建立cDNA 文库(cDNA Library),获得基因或探针。 2.与PCR 连用 RT-PCR。
第三节 真核生物基因的转录 真核与原核基因转录的区别:课件讲义第25 页两张表和下表所示: 一、真核生物的启动子 RNA pol Ⅱ 二、启动子特征和转录因子 1. RNA 聚合酶Ⅰ效率最高
2. RNA 聚合酶Ⅱ 3. RNA 聚合酶Ⅲ 基因内启动子/基因外启动子 1. RNA pol Ⅱ 核心元件上游调控元件远端调控区
2. RNA pol Ⅰ
3. RNA pol Ⅲ 第四节 转录后产物加工 一、真核的mRNA 帽子结构 poly A 剪接 编辑
二、基因间隔序列的去除 mRNA;tRNA;rRNA。 实验证据: 三、tRNA
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