描述 本文介绍了酵母的间接免疫荧光染色技术，该技术用于观察酵母细胞内特定蛋白的分布情况。 步骤 1mL 酵母 (~0.2-0.5 OD) + 0.1mL 36% 甲醛，室温反应60分钟。
用1mL去离子水洗涤2次（离心10K，5秒）。在1mL SK缓冲液中重悬并超声处理5秒，设置为最低档位。
加入50μL新鲜的10倍消化缓冲液，室温反应10-15分钟，显微镜下观察细胞不应显得过暗，而是呈现出淡淡的光晕。
如果细胞染色不够，可以加入10μL聚赖氨酸，室温反应5分钟。吸去液体（用去离子水洗涤10μL，省略此步骤）。
将载玻片置于-20℃的甲醇中处理6分钟，然后在-20℃的丙酮中处理30秒，干燥（可在4℃保存）。
在每个孔中加入15μL 10% BSA（牛血清白蛋白）在PBS中，室温反应20分钟（湿盒中）。吸去液体。
加入15μL 1/200的YOL1/34（大鼠α-微管蛋白抗体）在10% BSA/PBS中，室温反应60分钟。
吸去液体（不要让其干燥），用PBS洗涤5次，每次15μL。
加入15μL 1/200的山羊抗大鼠-FITC抗体，室温反应60分钟（在黑暗、湿润的盒子中）。
吸去液体并洗涤5次，每次15μL PBS。
加入5μL DAPI和抗褪色封片介质（室温反应）。
对于αHA抗体：使用1/2000的12CA5与1/100的山羊αM C13反应10-15分钟。 消化缓冲液配方 10倍消化缓冲液：
488μL去离子水
0.5μLβ-巯基乙醇
8.5μL zymolyase 供应材料 所需的试剂和材料包括酵母细胞、甲醛、BSA、抗体等。 技巧 在操作过程中应注意避免细胞干燥，以确保染色效果。 (责任编辑：泉水) |