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背景介绍

细胞冷冻保存是实验室中常用的技术，能够长期保存细胞资源，便于后续研究和应用。啮齿动物细胞在含血清条件下冷冻，有助于维持细胞活性和完整性，广泛应用于基础生物学、药物筛选等领域。

操作步骤

1. 使用0.22微米过滤器对700毫升RPMI-1640培养基（含2mM L-谷氨酰胺）和200毫升胎牛血清（FBS）进行过滤灭菌。
2. 加入100毫升无菌二甲基亚砜（DMSO），充分混匀，制备冷冻保存液。
3. 收获处于对数生长期的细胞，采用标准方法计数并离心。
4. 用冷冻保存液将细胞重悬，细胞浓度调整为5×10⁶个/mL。
5. 按需分装细胞悬液至冻存管。
6. 将冻存管置于控速冷冻仪中，或先在-20℃冷冻约3小时，再转移至-70℃过夜。
7. 最终将细胞储存于液氮中长期保存。

注意事项

冷冻过程中需确保操作无菌，DMSO作为冷冻保护剂不可过量，避免细胞损伤。细胞复苏时应快速解冻并及时移除DMSO。

参考文献

无