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描述

本文介绍了一种通过双胸苷阻断法实现HeLa细胞在G1/S期边界（实际上是G1期）同步化的实验方法。该方法具有高效性，能够在培养物中实现几乎完全的细胞同步化。然而需要注意的是，该方法不适用于具有完整p53介导的细胞凋亡反应的细胞系。

实验步骤

1. 在标准DMEM培养基（含10%胎牛血清FBS）中培养HeLa细胞，直至细胞密度达到约40%的汇合度。
2. 将溶解于PBS中的胸苷加入培养基中，使其最终浓度达到2mM。
3. 将培养物置于37℃环境中孵育19小时（需严格控制时间）。
4. 移除培养基，用PBS清洗细胞3次。
5. 加入不含胸苷的新鲜培养基，并在37℃下孵育9小时。
6. 再次加入胸苷，使其最终浓度达到2mM，并在37℃下孵育16小时。
7. 用PBS清洗细胞，加入新鲜培养基。此时，细胞已同步化至G1期，并将在接下来的15小时内被“释放”以继续进行细胞周期。细胞将在约1-2个细胞周期内保持同步，随后逐渐恢复为非同步状态。

实验配方

• 标准Gibco或Invitrogen品牌的DMEM培养基。
• 任意品牌的胎牛血清（FBS）。
• Sigma品牌的胸苷粉末。

实验耗材

• 标准组织培养耗材即可满足实验需求。

实验小贴士

• 在操作过程中，无需使用过滤吸头。