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拟南芥根转化实验方法

拟南芥根转化实验是一种常用的植物基因转化技术,用于研究基因功能和肿瘤发生等。本文详细介绍了该实验的步骤,包括种子消毒、根培养、农杆菌感染、共培养和后续筛选等。

实验步骤

1. 种子消毒:将拟南芥种子在50%漂白液和0.1% SDS溶液中消毒10分钟,然后用无菌水冲洗5次。

2. 根培养:将消毒后的种子播种在含有适当抗生素的B5培养基上,4°C处理2天后转移到生长室培养7-10天,然后将幼苗转移到含有Timentin的B5培养基中继续培养至少10天。

3. 农杆菌感染:将拟南芥根切成0.3-0.5厘米的片段,与农杆菌菌液共培养40-50小时。

4. 共培养后处理:将根片段转移到含有Timentin的培养基上,进行后续的肿瘤发生或GUS活性检测等实验。

培养基配方

1. MS基本培养基:包含MS最小盐、MES、维生素、肌醇、蔗糖和琼脂,pH调至5.7。

2. 诱导愈伤组织培养基(CIM):包含MS最小盐、MES、维生素、肌醇、葡萄糖、IAA、2,4-D和Kinetin,pH调至5.7。

3. B5培养基:使用Gamborg's B5培养基,添加琼脂,pH调至5.7。

(责任编辑:泉水)