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尽管该方法最初是为筛选使用pRSET载体（Invitrogen）构建的克隆而开发的，但只要使用正确的引物，它同样适用于其他载体系统。

操作步骤如下：

1. 使用无菌的200ul吸头从琼脂平板上挑取一个菌落。将吸头触及一个新的琼脂平板，以复制该菌落，便于后续的质粒分离。将大部分菌落转移到含有50ul无菌水的1.5ml离心管中。

2. 涡旋振荡离心管以分散菌落，然后在沸水中煮5分钟，以裂解细胞并使DNase失活。

3. 在微型离心机中以最大速度离心1分钟，以去除细胞碎片。

4. 将10ul上清液转移到一个新的0.5ml离心管中，用于PCR反应。置于冰上待用。

5. 按照以下配方配制“主”反应混合液：

每个反应：
29ul H2O
1ul dNTP混合液（dATP、dCTP、dGTP、dTTP各10mM）
2ul 引物1（10pmol/ul）
2ul 引物2（10pmol/ul）
5ul 10 x PCR缓冲液
1ul Taq聚合酶（1U/ul）

6. 向每个样本中添加40ul反应混合液，轻轻混匀。在每个反应液表面添加75ul轻质矿物油。

7. 将离心管放入PCR仪，按照以下程序进行循环：
i) 94℃ 3分钟
ii) 55℃ 30秒
iii) 72℃ 2分钟
iv) 94℃ 15秒

在步骤i)和iv)之间循环35次。

8. 分析反应产物时，添加6ul 10x上样缓冲液，然后在琼脂糖凝胶上电泳10ml。