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背景介绍

细胞冷冻保存是生物医学研究中常用的技术，能够长期保存细胞资源，便于后续实验。啮齿动物细胞在含血清条件下冷冻保存，能有效降低细胞损伤，保证复苏后细胞的活性和功能。

操作流程

1. 用0.22微米滤膜分别过滤灭菌700毫升RPMI-1640培养基（含2mM L-谷氨酰胺）和200毫升胎牛血清（FBS）。
2. 加入100毫升无菌二甲基亚砜（DMSO），充分混匀，制备冷冻保存液。
3. 收获处于对数生长期的细胞，采用标准方法计数并离心收集。
4. 用冷冻保存液将细胞重悬，浓度为5×10⁶个细胞/毫升。
5. 按需分装细胞悬液至冻存管。
6. 将冻存管置于控速冷冻仪中缓慢降温，或先置于-20℃冷冻约3小时，再转至-70℃过夜。
7. 最终将细胞存放于液氮中长期保存。

学术要点

血清和DMSO的联合应用可有效保护细胞免受冷冻损伤，维持细胞存活率。 控速降温有助于减少冰晶形成，提升细胞复苏质量。

参考文献

如需详细配方、耗材和操作技巧，请参考相关细胞生物学实验手册。