PDS1::HA免疫荧光实验步骤详解
时间:2006-07-24 14:27 来源:bioguider.com 作者:未知 点击:次
描述:PDS1::HA免疫荧光实验是一种用于检测细胞中特定蛋白质的实验技术。本文详细介绍了该实验的步骤和操作流程。 步骤: 1. 培养细胞至OD 0.5。 2. 分别收获24毫升和6毫升的细胞培养物,并将其重悬于4%甲醛固定液中。 3. 在不同时间点(10、20、30和45分钟)进行固定,然后洗涤细胞。 4. 使用0.1 M KPO4(pH 6.5)和1.2 M山梨醇进行洗涤和重悬细胞。 5. 使用β-巯基乙醇和球状酶进行细胞球化处理。 6. 制备多聚赖氨酸涂层载玻片,并将球化细胞沉积在载玻片上。 7. 使用-20°C甲醇和丙酮进行固定和脱水处理。 8. 使用PBS-BSA进行封闭,然后添加一抗(12CA5)和二抗(山羊抗小鼠Cy3)进行免疫荧光标记。 9. 使用DAPI进行核染色,并用指甲油封片。 (责任编辑:泉水) |