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细胞克隆形成生存实验（Cell Clonogenic Survival Assay）是一种用于评估黏附性细胞在化学或辐射损伤后存活和增殖能力的实验方法。

实验步骤

1. 将细胞在常规培养基中培养至70%融合度，然后用适当的化学药物或辐射剂量处理细胞。确保包含未处理的对照组。

2. 在预设的终点时间，用胰蛋白酶消化细胞并进行常规计数。

3. 将1000个细胞重新接种到新的60mm或100mm组织培养皿中（重复两次），并在37°C、5% CO2的孵箱中培养9天。在第5天更换新鲜培养基。（见小贴士#1）

4. 第9天（或当细胞集落生长到约50个细胞时），去除培养基，加入1ml（60mm培养皿）或2ml（100mm培养皿）的克隆形成试剂，室温反应45分钟。

5. 用PBS清洗细胞两次，并计数蓝色集落。

6. 数据可表示为相对于对照组的存活率百分比：((处理组平均计数)/(对照组平均计数))×100。

试剂配方

克隆形成试剂：50%乙醇，0.25% 1,9-二甲基亚甲基蓝。

材料供应

1,9-二甲基亚甲基蓝（Sigma Aldrich，Cat.# 34,108-8）。

小贴士

小贴士#1：由于细胞密度较低，部分细胞可能难以黏附到培养皿上。建议使用Sarstedt的Cell Plus培养皿以增加黏附性，或用聚赖氨酸处理培养皿。