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描述

本方案详细描述了制备电转感受态农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）的标准实验流程，适用于菌株GV2260等。电转感受态细胞可用于高效转化质粒DNA，广泛应用于植物基因工程和分子生物学研究。

步骤

1. 从新鲜划线的平板上挑取单菌落，接种于5 ml LB培养基（含适当抗生素：对于GV2260，添加利福平25 μg/ml、链霉素50 μg/ml和羧苄青霉素50 μg/ml），28°C振荡培养过夜（约16小时）。

2. 次日早晨，将过夜培养物接种至100 ml LB培养基（含适当抗生素），28°C振荡培养至OD600达到0.8-1.0。

3. 将培养物转移至预冷（2°C）的Sorvall GSA转子中，4000 rpm离心10分钟，收集菌体。

4. 弃上清，用5 ml预冷的无菌水重悬菌体（吹打混匀），再加入100 ml预冷的无菌水。

5. 再次离心（4000 rpm，2°C）15分钟。

6. 弃上清，用100 ml预冷的无菌水重悬菌体。

7. 再次离心（4000 rpm，2°C）20分钟。

8. 弃上清，用40 ml预冷的10%甘油（无菌）重悬菌体。

9. 将菌液转移至Corning 50 ml聚丙烯管中，使用预冷的Sorvall SS-34转子，3000 rpm离心15分钟。注意：50 ml管可放入转子但无法盖上盖子，因此需确保转子已牢固固定在离心机中。

10. 快速弃上清（菌体沉淀较松散），用等体积预冷的20%甘油（无菌）重悬菌体（通常为0.5-1.0 ml）。

11. 细胞可立即使用，或分装后于-80°C冷冻保存备用。

电转感受态农杆菌的转化

1. 取100-150 μl感受态细胞，加入500 ng-1 μg质粒DNA。

2. 在2.47 kV、2000 Ω、25 μF条件下电击转化。

3. 电击后立即加入1 ml LB培养基，28°C振荡培养2小时。

4. 涂布于含适当抗生素的LB琼脂平板上。