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描述

电穿孔法是一种将外源DNA导入农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）细胞的高效方法。本方案详细描述了制备感受态细胞、电转化及后续培养的步骤。

实验步骤

1. 在28°C下过夜培养农杆菌菌株。
2. 将菌液用所需培养基稀释10倍（每次电转化需8 ml）。
3. 在28°C下培养至OD600介于0.5-1.0之间。
4. 在4°C下以4000 g离心10分钟。
5. 用预冷的Millipore水洗涤细胞，体积为原培养液的2倍。
6. 再次离心。
7. 用预冷的10%甘油洗涤细胞，体积为原培养液。
8. 再次离心。
9. 用200倍体积的10%甘油重悬细胞。
10. 每次电转化使用40 μl该悬液。
11. 细胞可在-80°C保存约一个月。
12. 1 μl小提质粒DNA足够用于一次转化。
13. 在2.5 kV、200 Ω和25 μF条件下电穿孔，时间常数应在4.6-4.9之间。
14. 电穿孔后立即加入960 μl SOC培养基，在28°C下培养1小时。
15. 将细胞按不同稀释度涂板。

试剂配方

（原文未提供具体配方，建议参考标准分子生物学手册配制SOC培养基和10%甘油溶液。）

所需材料

（原文未列出，通常需要电穿孔仪、电转杯、离心管、无菌水等。）

提示

（原文未提供，建议注意保持低温操作，避免细胞损伤；电转杯需预冷；DNA应无盐离子污染。）