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氯化铷法是一种经典的化学转化方法，用于制备大肠杆菌感受态细胞，使其能够高效摄取外源DNA。该方法通过氯化铷处理细菌，改变细胞膜通透性，从而提升转化效率。以下为详细操作步骤及所需试剂配方。

操作步骤

1. 从过夜培养物中接种1 ml至100 ml Psi肉汤中（可根据需要按比例扩大或缩小）。在37℃振荡培养至A550=0.48。
2. 冰浴15分钟。
3. 在合适的离心管中，以3000-5000×g离心5分钟（约5000 rpm，使用Sorvall SS-34转子）收集细胞。
4. 弃上清，加入0.4倍原体积（此处为40 ml）的TfbI缓冲液，重悬细胞，冰浴15分钟。
5. 按步骤3再次离心收集细胞。
6. 弃上清，用0.04倍原体积的TfbII缓冲液重悬，冰浴15分钟。可立即使用或快速冷冻于-70℃保存。通常分装为0.25-0.5 ml等份。在-70至-80℃冰箱保存前，用乙醇-干冰或液氮快速冷冻。使用前在冰上解冻。

通常用50 μl感受态细胞转化2-10 μl连接反应产物，可获得1×10^8至1×10^9 CFU/μg DNA的转化效率。

试剂配方

Psi肉汤（每升）：Bacto酵母提取物5 g，Bacto胰蛋白胨20 g，硫酸镁5 g，用氢氧化钾调pH至7.6。

TfbI缓冲液（每200 ml）：乙酸钾0.588 g（30 mM），氯化铷2.42 g（100 mM），氯化钙0.294 g（10 mM），氯化锰2.0 g（50 mM），甘油30 ml（15% v/v），用稀乙酸调pH至5.8。

TfbII缓冲液（每100 ml）：MOPS 0.21 g（10 mM），氯化钙1.1 g（75 mM），氯化铷0.121 g（10 mM），甘油15 ml（15% v/v），用稀NaOH调pH至6.5。