附录四　实验室常用技术参数资料

　　一、核酸及蛋白质常用数据

1．核苷三磷酸的物理常数

化合物

分子量

λmax(pH7.0)

1摩尔溶液（pH7.0）中λmax时的最大吸收值

OD₂₈₀/OD₂₆₀

ATP

507

259

15400

0.15

CTP

483

271

9000

0.97

GTP

523

253

13700

0.66

UTP

484

262

10000

0.38

dATP

494

259

15200

0.15

dCTP

467

271

9300

0.98

dGTP

507

253

13700

0.66

dTTP

482

267

9600

0.71

2．常用核酸的长度与分子量

核酸

核苷酸数

分子量

λDNA

48502（双链环状）

3.0×10⁷

pBR322 4363（双链）

2.8×10⁶

28SrRNA 4800

1.6×10⁶

23SrRNA 3700

1.2×10⁶

18SrRNA 1900

6.1×10⁵

19SrRNA 1700

5.5×10⁵

5SrRNA 120

3.6×10⁴

tRNA（大肠杆菌） 75

2.5×10⁴

3．常用核酸蛋白换算数据

　　（1）重量换算

　　1μg=10^-6g　　　　　 1pg=10^-12g

　　1ng=10^-9g 　　　　　1fg=10^-15g

　　（2）分光光度换算：

　　1A₂₆₀双链DNA=50μg/ml

　　1A₂₆₀单链DNA=30μg/ml

　　1A₂₆₀单链RNA=40μg/ml

　　（3）DNA摩尔换算：

　　1μg 100bp DNA=1.52pmol=3.03pmol末端

　　1μg pBR322 DNA=0.36pmol

　　1pmol 1000bp DNA=0.66μg

　　1pmol pBR322=2.8μg

　　1kb双链DNA（钠盐）=6.6×10⁵道尔顿

　　1kb单链DNA（钠盐）=3.3×10⁵道尔顿

　　1kb单链RNA（钠盐）=3.4×10⁵道尔顿

　　（4）蛋白摩尔换算：

　　100pmol分子量100，000蛋白质=10μg

　　100pmol分子量50，000蛋白质=5μg

　　100pmol分子量10，000蛋白质=1μg

　　氨基酸的平均分子量=126.7道尔顿

　　（5）蛋白质/DNA换算：

　　1kb DNA=333 个氨基酸编码容量=3.7×10⁴MW蛋白质

　　10，000MW蛋白质=270bp DNA

　　30，000MW蛋白质=810bp DNA

　　50，000MW蛋白质=1.35kb

　　100，000MW蛋白质=2.7kb DNA

4．常用蛋白质分子量标准参照物

（1）高分子量标准参照 （2）中分子量标准参照 （3）低分子量标准参照 肌球蛋白 分子量 磷酸化酶B 97，400 碳酸酐酶 31，00 肌球蛋白 212，000 牛血清白蛋白 66，200 大豆脻蛋白酶 21，500 β-半乳糖甘酶B 116，000 谷氨酶脱氢酶 55，000 抑制剂 　 磷酸化酶B 97，400 卵白蛋白 42，700 马心肌球蛋白 16，900 牛血清白蛋白 66，200 醛缩酶 40，000 溶菌酶 14，400 过氧化氢酶` 57，000 碳酸酐酶 31，000 肌球蛋白（F1） 8，100 醛缩酶 40，000 大豆脻蛋白酶 21，500 肌球蛋白（F2） 6，200 　 　 抑制剂 　 肌球蛋白（F3） 2，500 　 　 溶菌酶 14，400 　 　

5．常用DNA分子量标准参照物

λDNA/HindⅢ

λDNA/EcoRⅠ

λ/HindⅢ+EcoRⅠ

pBR322/HaeⅢ

23130

21226

21227

587

123

9416

7421

5148

405

104

6557

5804

4973

504

89

4361

5643

4268

458

80

2322

4843

3530

434

64

2027

3530

2027

267

57

564 　

1904

234

51

125 　

1584

213

21 　 　

1375

192

18 　 　

974

184

11 　 　

831

124

7 　 　

564 　 　 　 　

125 　 　

续上表

pBR322/HinfⅠ

φχ174/HinfⅠ

φχ174/Hae Ⅲ

φχ174/TapⅠ

1631

726

140

1353

2914

517

713

118

1078

1175

506

553

100

872

404

396

500

82

603

327

344

417

66

310

231

298

413

48

281

141

221

311

42

271

87

220

249

40

234

54

154

200

24

194

33

75

151 　

118

20 　 　 　

72 　

　　二、常用缓冲液

　　1．分子克隆常用缓冲液

　　2．磷酸缓冲液

　　（1）25℃下0.1mol/L磷酸钾缓冲液的配制^※

pH

1mol/L K₂HPO₄(ml)

1mol/L KH₂PO₄(ml)

5.8

8.5

91.5

6.0

13.2

86.8

6.2

19.2

80.8

6.4

27.8

72.2

6.6

38.1

61.9

6.8

49.7

50.3

7.0

61.5

38.5

7.2

71.7

28.3

7.4

80.2

19.8

7.6

86.6

13.4

7.8

90.8

9.2

8.0

94.0

6.2

　　（2）25℃下0.1mol/L磷酸钠缓冲液的配制^※

pH

1mol/L Na₂HPO₄(ml)

1mol/L NaH₂PO₄(ml)

5.8

7.9

92.1

6.0

12.0

88.0

6.2

17.8

82.2

6.4

25.5

74.5

6.6

35.2

64.8

6.8

46.3

53.7

7.0

57.7

42.3

7.2

68.4

31.6

7.4

77.4

22.6

7.6

84.5

15.5

7.8

89.6

10.4

8.0

93.2

6.8

　　※:用蒸馏水将混合的两种1mol/L贮存液稀释至1000ml，根据Henderson-Hasselbalch方程计算其pH值：